PKH67染料/荧光/红色荧光PKH26/羧基荧光素二醋酸盐

作者：杨超月

原创 PKH67染料/荧光/红色荧光PKH26/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记外泌体

2022-04-27 09:52 来源: 瑞禧生物定制

原标题：PKH67染料/荧光/红色荧光PKH26/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记外泌体

今天瑞禧生物小编为大家分享整理的内容是PKH67荧光染料/荧光/红色荧光染料/红色荧光PKH26/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记外泌体的研究制备，一起来看！

PKH67染料/荧光/红色荧光PKH26/羧基荧光素二醋酸盐

PKH67荧光染料标记外泌体的制备方法

1.采用Ficoll密度梯度离心法，分离培养MM患者的BM-MSCs;磁珠分选MM患者原代骨髓瘤细胞。

2.采用超速离心法提取骨髓瘤患者的BM-MSCs源性外泌体。

3.应用透射电子显微镜及Western blot检测鉴定 BM-MSCs源性外泌体。

4.将PKH67荧光标记的外泌体与骨髓瘤细胞共培养，共聚焦显微镜下观察骨髓瘤细胞对BM-MSCs源性外泌体的摄取情况并拍照。

5.实时定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266，与伴EMD 的MM

患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴 EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组EMT( Vimentin.Twist)、干性(NANOG、OCT4）相关标志物mRNA的表达情况。

6. Western blot检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞，

与伴 EMD 的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴 EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组及LP-1、U266或原代骨髓瘤细胞单培养组MM细胞的EMT相关标志物（E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、B-Catenin）蛋白的表达情况。

7.应用Transwell法检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞，与伴 EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴EMD 的 MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组及LP-1、U266或原代骨髓瘤细胞单培养组MM细胞的侵袭性有无差别。

结果

1.BM-MSCs源性外泌体在透射电镜下显示直径在100nm左右，具有明显的膜，立体结构清晰，形状呈茶托样或凹半球样。Western blot检测其表达CD81,不表达 Cytochrome C。

2.多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞对多发性骨髓瘤患者BM-MSCs源性外泌体有明显的摄取。

3.与不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组相比，多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266和伴EMD 的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组的骨髓瘤细胞EMT ( Vimentin、Twist）相关标志物及干性(NANOG、OCT4）相关标志物的mRNA表达上调。

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