五味子油联合莪术油防治肝纤维化的作用及机制

作者：杨超月

五味子油联合莪术油防治肝纤维化的作用及机制研究

2022-03-24 06:11 来源: 武哥说生活

原标题：五味子油联合莪术油防治肝纤维化的作用及机制研究

摘要：目的研究五味子油联合莪术油防治肝纤维化的作用及机制。方法采用蛋氨酸和胆碱缺乏及铁添加氨基酸饲料喂养小鼠构建非酒精脂肪肝炎伴肝纤维化模型，将112 只C57BL/6 小鼠分为对照组、模型组、扶正化瘀胶囊（585mg/kg ）组、五味子油单独给药组、莪术油单独给药组以及五味子油联合莪术油给药组；造模成功后，对照组和模型组ig0.5% 羧甲基纤维素钠溶液，各给药组ig 相应药物，连续6 周；采用酶标仪测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase ，ALT ）和天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase ，AST ）活性；采用苏木素- 伊红（HE ）染色法观察各组小鼠肝组织病理变化；采用ELISA 法检测小鼠血清中转化生长因子-β1 （transforming growthfactor-β1 ，TGF-β1 ）、肿瘤坏死因子-α （tumor necrosisfactor-α ，TNF-α ）和肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline ，Hyp ）含量；采用qRT-PCR 法检测小鼠肝组织中I 型胶原（Collagen I ）、TGF-β1 和Smad3 的mRNA 表达情况。人肝星形LX-2 细胞给予药物预处理，再加入TGF-β1 因子，采用Western blotting 法检测细胞Collagen I 和α- 平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ，α-SMA ）蛋白表达情况。结果体内实验结果显示，与模型组相比，各给药组血清中ALT 和AST 活性均显著降低（P ＜0.05 、0.01 、0.001 ），其中五味子油与莪术油联合给药高剂量组抑制小鼠ALT 活性更为显著；肝脏颜色、光泽和质地都有明显改善，肝组织中脂肪空泡化改善、炎性细胞浸润减少；肝组织Hyp 和血清TGF-β1 、TNF-α 含量均显著降低（P ＜0.05 、0.01 、0.001 ），其中联合给药高剂量组改善小鼠肝组织Hyp 含量更为显著；肝组织Collagen I 、TGF-β1 和Smad3 mRNA 表达水平显著降低（P ＜0.05 、0.01 、0.001 ）。体外实验结果显示，五味子油与莪术油联合给药组能下调TGF-β1 诱导的LX-2 细胞Collagen I 和α-SMA 蛋白表达。结论五味子油和莪术油均具有抗肝纤维化作用，且五味子油与莪术油联用的抗肝纤维化效应明显强于各药物的单独使用。

肝纤维化是由多种原因引起的慢性肝病，包括乙型和丙型肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝炎等[1-2]。肝脏损伤后会发生自我修复，此过程伴随着纤维化的发生。肝纤维化是一个动态过程，其特征是细胞外基质或疤痕的净积累和肝星状细胞的活化，导致慢性肝损伤[3-4]。虽然纤维化可以在消除损伤原因后逆转，但不加控制的慢性损伤会导致肝衰竭、肝硬化、肝癌，已成为一个日益严重的全球性健康问题[5-6]。近年来，逍遥散[7]、芍药苷[8]、人参皂苷[9]等中药在预防和治疗肝纤维化方面取得显著进展[10]。

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. 的干燥成熟果实，习称“北五味子”，其味酸、甘，性温，归肺、心、肾经，有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效，用于治疗久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗盗汗、津伤口渴、内热消渴、心悸失眠[11]。五味子油可以经压榨和CO 2超临界萃取得到，研究表明木脂素类成分是五味子的主要活性成分，具有保护肝脏、改善认知障碍、抗炎、调节免疫和抗肿瘤等作用[12-15]。莪术的主要活性成分如姜黄素、榄香烯、莪术醇、吉马酮治疗肝脏疾病疗效确切[16]，莪术油是从莪术的根、茎中提取的挥发油，具有活血行气、化瘀消癥之功效。已有文献报道莪术油能够减轻血瘀证肝纤维化小鼠的肝纤维化程度[17-18]。肝星状细胞的活化是分泌基质蛋白的肌成纤维细胞的主要细胞来源，是肝纤维化的主要驱动力[2]。而转化生长因子-β （transforming growth factor-β ，TGF-β ）信号通路被认为是驱动肝星状细胞活化和诱导细胞外基质产生的关键纤维化通路[19-20]。本研究拟探讨五味子油以及联合莪术油能否通过TGF-β 信号通路来实现抗肝纤维化的药效作用，并阐明其作用机制，为治疗肝纤维化提供一种有开发前景的天然活性药物组合物。

1材料

1.1动物

1.2细胞

人肝星形LX-2 细胞（批号YB-H3614 ）购自上海钰博巴西vs瑞士让球股份有限公司。

1.3药品与试剂

1.4仪器