黄芩中黄芩苷的提取和精制

作者：张馨予

一、 实验目的
1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、 实验原理

黄芩中黄芩苷的提取和精制

黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。
黄芩苷为葡萄糖醛酸苷, 具有弱酸性, 其可在碱性溶液中溶解, 形成钠盐,在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离，进行精制。
本实验选用了60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照品，所以没做定量实验。
三、实验材料与仪器
  材料：黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板
仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸
  试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸
四、 实验步骤
1 黄芩苷的提取
将黄芩干燥根粉碎，称取粗粉100g，装入1L的圆底烧瓶，加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，90℃回流提取1h。提取完进行抽滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中，加300ml 60%乙醇继续回流30min，重复上一步再回流30min。合并3次滤液，65℃减压浓缩**无醇味，将水液水浴加热到80℃，用2mol/L的盐酸调PH**1~2，保温30min，室温静置12h，沉淀，2000r/min离心2min，弃上清，向沉淀中加10倍水量即
700ml，搅拌均匀，加10%氢氧化钠调PH**7，静置1h，2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液加热**40℃，搅拌均匀，加入等体积即700ml的60%乙醇，静置1h，2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液水浴加热**80℃，用2mol/L的盐酸调PH**1~2，保温30min，室温静置1h，沉淀，离心，弃上清液，得粗黄芩苷湿重43g。
2 黄芩苷的精制
  向粗黄芩苷中加入7倍水量即300ml，水浴加热**70℃，10%氢氧化钠调PH**7，完全溶解后，用2mol/L的盐酸调PH**6，加乙醇**含醇量70%，未出现明显沉淀，所以没过滤，用2mol/L的盐酸调PH**1~2，70℃保温20min，静置过夜。次日，沉淀很少，又80℃保温30min，离心，弃上清，得精制品，向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇，将精制品装入索氏提取器的滤纸中，加热回流**提取液颜色很浅，趁热抽滤，滤液减压浓缩一半，冷却，静置，结晶析出，静置30min，过滤，甲醇洗涤，得黄芩苷再精制品。用40倍量甲醇加热回流溶解，重复上述步骤可得黄芩苷重结晶。
3 黄芩苷的薄层层析
  吸附剂：硅胶G薄层层析板，厚0.25~0.3mm
  展开剂：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7：2：0.5：0.5 v/v/v）
  样品配成合适浓度的甲醇液，用点样毛细管点样，每点一次要等到干了才能点下次，点样斑点直径不大于2mm。层析缸用展开剂饱和20min后，将点样板垂直放入层析缸，上行展开，展层完毕后，取出，晾干，放在254nm紫外灯下观察。
4 黄芩苷的紫外吸收图谱
  取少量黄芩苷重结晶样品于50ml容量瓶中，加甲醇溶解**颜色微黄，用紫外分光光度计在200-400nm进行紫外扫描。
5黄芩苷的红外吸收图谱
  精确称取0.100g的溴化钾，压片测红外作为背景，再精确称取0.100g的溴化钾，加入极少量样品一起研成细粉，压片，测红外吸收图谱。
五、 实验结果
1 黄芩苷得率(％)=M／M0 x 100％
式中：M一所得黄芩苷精品重量 M0一提取时用黄芩的重量
本实验中M为0.132g，M0为100g，所以收率为0.132%。
2薄层层析

黄芩中黄芩苷的提取和精制

3 紫外光谱

黄芩中黄芩苷的提取和精制

由下图可知在200-400nm内**大吸收波长为278nm，与文献中（上图）的标准品的**大吸收波长一致。

4 红外光谱

黄芩中黄芩苷的提取和精制

黄芩苷红外图谱
3339 cm-1，宽峰： -OH伸缩振动
3030 cm-1左右：苯环=CH伸缩振动
2900 cm-1： C-H伸缩振动
1611、1575、1478、1450cm-1 :苯环骨架振动
1736 cm-1 ：C=O伸缩振动（葡萄糖醛酸）
1667cm-1： C=O伸缩振动（吡喃酮环）
1363 cm-1 ：C-O伸缩振动
1078 cm-1: C-O-C的对称和不对称伸缩振动
900~690 cm-1多个吸收峰：苯环取代
六、讨论
1由薄层板上的斑点可以看出虽然得到了一个比较明显的斑点，结合紫外图谱应该是黄芩苷，但是斑点上方有小淡斑存在，证明得到的结晶不是很纯。
2 红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合，不一致的原因可能是：黄芩产地不一样；本实验中得到的黄芩苷纯度不高。
3 本实验中产率不高，原因可能有：粗粉未浸泡；静置时间短；调PH时温度控制不好。