如何选择流动相

作者：杨超月

如果说气血是我们身体里运行不息的精微物质，那么如同动脉一样流淌在液相色谱周身的流动相，决定着仪器各硬件的寿命。同时，它也是造成液相色谱各种问题的主要源头。今天，小析姐和大家聊一聊如何选择合适的流动相开始，为大家系统地分享流动相的相关内容。

流动相的选择

用水当选超纯水，溶剂当用色谱纯，大家都知道，在使用液相色谱仪的过程中，选择纯度高的溶剂/水，有利于实验结果和仪器保养。

1、溶剂/水纯度对HPLC分析的影响

（1）从实验方法来说，如果有机溶剂或者水的纯度差，比如含有一些有机物杂质，就会影响基线，导致基线噪音变大或者基线漂移，有一些杂质有额外的紫外吸收，会产生一些鬼峰，甚至会影响到方法的分离度。

尤其是水的使用，如果水中除了氢离子和氧离子之外，还有其它的电解质的存在，有可能会因为重金属的反应，而对色谱峰的峰形造成影响。

（2）就仪器本身而言，质量差的水或有机溶剂，还会引入一些颗粒物，堵塞色谱柱或者液相色谱仪的过滤芯，从而影响仪器性能增加维护成本。

2、有机溶剂纯度的要求

不同的有机溶剂适用不同，比如化学纯、分析纯、优级纯，这种属于通用化学试剂的纯度分类，通常用于合成制备、工业生产或者化学实验室研究类的工作；农残级、光谱纯、色谱纯，此种溶剂是根据所适用的仪器分析技术或者特殊分析领域来进行分类的。

所以我们在购买溶剂的时候一定要选择更合适液相色谱的色谱纯溶剂。

3、水的纯度的要求

这里其实比较推荐大家使用纯水仪制出来的水，因为一般实验室还是用纯水仪比较方便。在使用水的时候，我们都会用电阻率来衡量水的纯度是不是符合液相色谱的要求，比如当纯水仪制的水电阻率达到18.2MΩ才可以使用。

流动相的配制

颗粒虽微莫小觑，三个卫士需上岗

流动相的配制是我们日常实验最普通的一环，也是做实验的第一步，所以流动相配制的质量直接影响到实验的结果成功与否。

这里着重说一下影响流动相质量的过滤和脱气。

过滤，颗粒物堵塞系统对色谱分析的影响，无论是流动相还是样品，都可能会有一些颗粒物的存在，如果颗粒物被引入了液相系统，不仅损害仪器，还会影响流速的准确性、流动相的混合比例以及方法的重现性。

此时就需要启动保护流动相的三个卫士，来去除这些颗粒物和杂质。

第一个卫士：流动相过滤

滤膜的材质有多种，有些是适合过滤水相的，有些是适合过滤有机相的，也有一些可过滤有机相也可过滤水相的兼容滤膜。但大部分兼容的滤膜很容易被有机相溶解，在这里有两点需要注意：

（1）不要用过滤水的滤膜来过滤有机相，也不要过滤水相和有机相的混合流动相，如果有机相把滤膜溶解了，不但起不到过滤作用，反而会引入新的杂质，同样会堵塞系统；

（2）另外需要注意的是，若使用常规颗粒的色谱柱，使用0.45μm的滤膜即可。若使用的是UHPLC，由于色谱柱填料比常规色谱柱小很多，所以建议使用0.2μm的滤膜对流动相进行过滤。

第二个卫士：样品过滤

虽然液相色谱的进样量很少，是微升级的，但如果样品中含有颗粒物，同样会堵塞系统和色谱柱，所以样品过滤很有必要。样品过滤膜同样有专门过滤水的和过滤有机相的，也有水相、有机相兼容的滤膜。

样品过滤的建议步骤：

（1）建议注射器先吸入一点空气，这样能起到节省样品溶液的作用；

（2）将样品吸入注射器；

（3）将注射器翻转导致，擦净顶端的残留物并将样品过滤膜固定在注射器上；

（4）将溶液过滤后注入样品瓶。

如何选择流动相

第三个卫士：在线过滤器