质粒DNA对大肠杆菌的遗传转化



质粒DNA对大肠杆菌的遗传转化

1、重组质粒的鉴定

当质粒的重组或其他载体重组后,通常会发生质粒的重组失败,包括质粒的本身环化。因而要求进行筛选,把重组成功的质粒找出来。

在目前常用的质粒和其他载体中含有相应的抗生素抗性基因,若重组成功,或不含质粒的自身环化,抗生素抗性基因表达,被转化的大肠杆菌便具备抵抗相应抗生素的能力,可以在含该抗生素的培养基上生长传代。若重组失败,大肠杆菌便不能抵抗该抗生素而死亡。

2、为扩增质粒和其他载体作准备

由于大肠杆菌繁殖快,在适宜的条件下繁殖--代仅需要20-30min,而且常用质粒可以在大肠杆菌中增殖达到几百个拷贝。因此,通过对转化成功的大肠杆菌培养,可以在短时间内极大的扩增目的质粒。

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