【农院·研途】酵母双杂交

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

【农院·研途】酵母双杂交---蛋白互作实验科普

2021-12-23 21:59 来源: 一起出游吧

原标题：【农院·研途】酵母双杂交---蛋白互作实验科普

酵母双杂交Yeast two-hybrid

——验证蛋白与蛋白之间互作

相信大家都在分子生物学的课程中学习过酵母双杂交技术，在蛋白互作实验中酵母双杂交技术也越来越多被使用。

酵母双杂交技术的原理是什么？

流程是什么？

会得到什么样的结果？

在分子实验中得到了怎样的应用呢？

就让大家带着这些问题，一起了解酵母双杂交技术吧！

酵母双杂原理

酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）是在 真核模式生物酵母中进行的， 研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。

酵母转录因子GAL4在结构上是组件式，往往有两个或两个以上的结构，功能上由相互独立的结构域构成，其中包括DNA结合功能域（DNA binding domain，DNA-BD）和转录激活结构域（activation domain，DNA-AD）。

这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性，并可激活上游激活序列的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。

实验流程

①构建相关载体

将A基因连接到载体pGADT7-AD，片段基因B连接到载体pGBKT7-BD。

②酵母感受态制备

③酵母双杂交

预期结果

SD/-T/-L

二缺培养基

SD/-T/-H/-L/-A

四缺培养基

Positive

阳性对照

Negative

阴性对照

H1-BD＋SIZFP8L-BD

实验组

二缺培养基（SD/-T/-L）上生长，代表菌的活性没问题；

四缺培养基（SD/-T/-H/-L/-A）上生长，代表蛋白之间互作。

酵母双杂交系统的应用

可研究已知蛋白间的相互作用、寻找在蛋白—蛋白相互作用中起关键作用的结构域、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白。相信随着分子生物学技术的发展与推广，酵母双杂交技术在今后的蛋白质组学研究中将发挥更大的作用。

酵母双杂交技术主要是用于研究蛋白质之间的相互作用， 核心关键步骤是酵母细胞的培养，它关系到酵母细胞的浓度和生长状态，一定要严格控制酵母细胞的培养时间。

通过这次的科普知识，你是否对酵母双杂这个实验有更近一步的学习呢？

再为大家推荐几篇相关的文献供大家学习：

https://www.sdgreenchem.com/news/

文字：卢犇轶

图片：来源于网络