关于HPLC色谱中检测限和定量限中信噪比S/N的一些

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

检测限和定量限是分析方法的重要属性，在中国药典2020年版分析方法验证指导原则中规定这2项是重要的验证指标，包括定量、限度的杂质测定需要着重考虑检测限和定量限，且在该版本指导原则中删除了校正因子以及其中定量限的规定。本文试图从定义、测量方法、常见问题和解决方案进行简单的讨论，为分析方法验证活动中检测限和定量限的的开展提供一定的参考。

1、检测限和定量限的定义

检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量，定量限系指试样中被测物能被定量测定的最低量。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。而对微量或痕量药物分析、定量测定药物杂质和降解产物时，应确定方法的定量限，需要注意的是定量限的测定结果应符合准确度和精密度要求。

2、一般规定及要求

检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。药品的鉴别试验和杂质检査方法，均应通过测试确定方法的检测限。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。常用的方法如下。

直观法

用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

信噪比法

用于能显示基线噪声的分析方法，即把巳知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的被测物质最低浓度或量。一般以信噪比为3 :1或2 : 1 时相应浓度或注人仪器的量确定检测限。

基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法

按照L O D = 3 .3 δ /S公式计算。式中L O D :检测限；

δ：响应值的偏差；S : 标准曲线的斜率。

δ可以通过下列方法测得：①测定空白值的标准偏差；

②标准曲线的剩余标准偏差或截距的标准偏差来代替。

数据要求

上述计算方法获得的检测限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果。

3、信噪比法具体怎么操作

信噪比的规定1：一种使空白样与供试品，以空白样目标峰位置的信号为噪音（ASTM，此噪音为欧盟和美国认可的噪音参数）（注意agilent此时应该选择的噪声时间至少大于1min，waters建议为半峰宽的20倍），以供试品目标峰的峰高为信号。以此手工计算信噪比。这种方法是最符合药典要求，限制条件更高，更科学。

信噪比的规定2：另一种是只用供试品，以供试品除目标峰之外选取基线平滑段为噪音，此法可直接读出信噪比（性能报告+噪音），但该法对选择的平滑段存在很大的随意性，如位置和时间长短（国内有些公司规定为0.2min）。此法虽然方便快速，而且基本能成功，但其实很大程度上存在数据拼凑的嫌疑。

另关于噪音的选择时间USP为>=5倍半峰宽，EP、JP为>=20倍半峰宽。

检测限：针对数据的要求问题，除了上述药典要求外。检测限应该对比的是同一个样品6针的平均信噪比（不得小于3）和保留时间（应不大于2.0%）（即药典虽然没有要求定量要求（准确度和精密度）），但应保证精密度）

定量限：杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。3倍信噪比是检出限，10倍信噪比是定量限，除此之外，检出限表示方法能测出该物质时的最低浓度。定量限则表示方法能准确定量出该物质的最低浓度。

具体来讲：

检测限：分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量；

定量限：分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。

检出限和定量限的区别在于：

检测限：