知识分享:腺相关病毒(AAV)表达系统



2. 在注射病毒或是其后的解剖时,使用一次性手术服或是相当的衣物,如果是感染细胞时,可以穿着实验服。

3. 佩戴护目镜或是面罩。

4. 所有的操作应当是在 Class II 生物安全柜中进行。如果实验条件不能满足,则应当在空气稳定的空间中操作,减少操作时间和病毒与外界接触的时间。

不慎接触病毒时的急救

1. 病毒飞溅或是气溶胶与人体接触–眼,皮肤或是粘膜用大量清水冲洗眼睛或是其他接触的部位至少15 分钟。

2. 含病毒的针头或是其他利器刺破皮肤。伤口立即用10%的碘伏溶液擦洗数分钟,然后用大量清水冲洗。

消毒处理

对AAV 有效的消毒剂是新鲜配制的1%次氯酸钠溶液。

♦ 配制时,将84 消毒液原液加水稀释。

♦ 浸泡15min 以达到消毒目的。

♦ 可以用它处理可回收的物品如玻璃器皿或是污染废液(终浓度是1%),但如果是不锈钢器物切不可直接擦拭,否则会引起表面腐蚀。

其他的处理方式包括用2%戊二醛溶液或是0.25% SDS 溶液,还可以121℃高温消毒1小时。

腺相关病毒的保存

收到产品后,请根据实验所需的量在无菌操作台中将病毒进行分装,并于-80 ℃冰箱冻存。分装病毒时请将病毒始终放置在冰上。

注:请避免反复冻融。

【维真生物】提供AAV现货和AAV包装服务,已助力多位客户在顶级期刊发表文章。

AAV载体概述【更多内容详见(维真生物官网→病毒包装→腺相关病毒→病毒简介)

腺相关病毒(AAV)是一种无包膜的单链DNA病毒,是细小病毒家族的一员,通常需要腺病毒、疱疹病毒等辅助病毒的帮助,才能进行自我复制。在没有辅助病毒的情况下,

AAV可在哺乳动物细胞中长期潜伏。现阶段已发现的 AAV 有 12 种的血清型(AAV1 至 AAV12)和 130多种突变型[1] 。不同AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性,因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别[2],这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同。在基因治疗中,将携带有外源基因的重组腺相关病毒定点整合到宿主基因组,既能克服随机插入所导致的染色体缺失和基因重排等潜在危险,又可以达到长期治疗的目的。

野生型AAV基因组编码两大开放阅读框架(open reading frames,ORF) rep和cap,它们位于两侧的末端倒转重复序列(interted teminal repeats,ITRs)之间。在 维真生物的AAV 病毒基因传递系统中,只有ITRs是复制和包装所必需的顺式元件,rep和cap 基因从病毒载体中被转移到辅助质粒AAV rep/cap Vector中,转移后空出的位置是允许外源基因插入病毒基因组中的最大限度。在辅助质粒Ad Helper Vector和pAAV-rep/cap Vector的帮助下,仅需两端的 ITR 就能将携带的外源片段包装进入腺相关病毒颗粒。

重组腺相关病毒是基因传递和表达的一个重要工具[3],其具有广泛的宿主范围及组织感染能力,既能感染分裂细胞,也能转导外源基因进入非分裂细胞,长期表达外源基因,而不依赖于宿主细胞活跃的分裂能力。在维真生物公司的AAV病毒基因传递系统中,包含末端重复序列(ITRs)的载体质粒pAV-FH AAV 载体与包含rep/cap 基因的辅助质粒pAAV-rep/cap载体没有任何共同区域,避免通过重组而恢复出野生型病毒,宿主细胞免疫反应被降至最低,从而允许对具有免疫能力的宿主细胞进行基因传递。我们的AAV病毒基因传递系统可以生产出重组病毒滴度≥1011 病毒颗粒/毫升的病毒,浓缩后滴度最高可达1014 病毒颗粒/毫升,可以最大程度保证在动物细胞中的基因传递。rAAV进入细胞后,作为附加的DNA能稳定存在。基因的表达通常在第2〜7天出现峰值,并可在体内持续数周甚至数月。

腺相关病毒基因传递和表达的优势

1.宿主范围广:随时可转染的AAV可高效感染分裂和非分裂细胞;

2.多种血清型 :AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 和AAV9等;

3.安全性高:ITR 序列和 rep/cap 基因分别由独立的质粒表达;未发现AAV对人体致病,rAAV去除了wtAAV基因组的96%,进一步保证了安全性;

4.免疫原性低:AAV2 的基因组仅 4681 个核苷酸,便于用常规的重组 DNA技术进行操作,而且进行动物实验时造成的免疫反应小;

维真生物腺相关病毒的优势

1)载体全:不同的启动子(神经特异性启动子Human Synapsin、CamkIIα、GFAP等)和多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP和luciferase等)可供客户选择;

2) 货期短:AAV克隆载体均与我们18,000个预制人类全长cDNA ORF克隆载体MCS区通用,行业中的生产周期短;

3)滴度高:可提供 1012V.G/ml及以上滴度的病毒.,最高可达1014V.G/ml;

4)服务优:可根据客户的具体需求提供特殊定制服务。

维真生物 rAAV产品简介




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