细胞器标记物和亚细胞分离
细胞器标记物和亚细胞分离
Parisis Nikos Ph. D.
nnparisis at gmail dot com
译者
王秀英博士
mary at labome dot com
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)
DOI
日期
更新 : 2013-10-19; 原始版 : 2013-01-01
引用
实验材料和方法 2013;3:181
细胞器标记物
高尔基体标记物
高尔基体的主要功能是对大分子进行正确折叠并将其分泌到胞外环境中（通过反面高尔基进行胞吐）或在胞内环境中与其它蛋白和脂类一起运输（高尔基堆）。高尔基体也可以合成蛋白聚糖和碳水化合物。它们通常在有丝分裂中解体并在有丝分裂完成后的每个子细胞中重新组装起来 。
RCAS1或EBAG9
表达在SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原是一种III型跨膜高尔基体蛋白 ，并且主要是特异性地定位于内质网-高尔基中间腔室和顺面高尔基网 。
突触融合蛋白6
主要发现于高尔基体并参与胞内囊泡的输送 。
亚胺甲基转移酶环化脱氨酶（FTCD）
是分子量为58 kDa且具有转移酶和脱氨酶活性的酶。它位于高尔基体并辅助波形蛋白从高尔基体开始成束。但最近也发现存在于中心体中 。
高尔基体蛋白亚科A成员2（或GM130）
是一种高尔基体自体抗原，可能在内质网-高尔基体间的运输过程中有一定功能 。
alpha-甘露糖苷酶II
位于高尔基体膜并参与蛋白质糖基化，负责调控N-聚糖的合成。
beta1,4-半乳糖基转移酶6（b4Gal-T6）
参与葡糖鞘脂类的生物合成，是另一种高尔基内膜标记物。
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图 2. （A）引自 ，RPE1细胞中与GM130共定位结果显示PTTG1与高尔基体相结合。（B）引自 ，通过分别与M6PR和PDI进行共定位，显示ZnT2位于晚期内涵体与内质网。（C）引自 ，使用钙联接蛋白作为标记物显示Hepa 1-6中ATZ位于内质网。（D）用DAPI、alpha-微管蛋白及gamma-微管蛋白分别对DNA、微管及中心体进行免疫荧光标记-引自Abcam。（E）在有丝分裂的HeLa细胞中用DAPI染色染色体、CREST染色着丝粒以及H3S10ph染色有丝分裂的染色体进行免疫荧光实验。引自 。
TGN38
调控从反面高尔基网（分泌机制）到质膜的膜运输。使用布雷菲德菌素A处理后，高尔基堆会发生解体，反面高尔基网也会随着中心体一起瓦解。因此，TGN38染色可以区分反面高尔基网与高尔基堆。
线粒体标记物
线粒体（希腊语mitos，μ07το09 = 线 + chondrion，χονδρ07ον = 颗粒）是直径为0.5-1.0 μm的一种细胞器。由于它们以三磷酸腺苷（ATP）的形式合成能量，因此被认为是细胞的发电厂。但它们还有一些其它的功能。线粒体是由内膜、外膜、膜间腔、嵴和基质组成的，它们独立于细胞核并含有自己的DNA。在人类中，已经发现了600多种不同的蛋白质 ，其中一些被用作标记物。
氨甲酰磷酸合成酶I（CPS1）
分子量为163 kDa，是参与尿素循环并从细胞中去除多余氨的酶的线粒体同工酶。CPS1是肝脏和肾脏线粒体的标记物。
抑制素
线粒体内膜上分子量为30 kDa的蛋白，可能调控线粒体呼吸功能。它参与凋亡、细胞周期调控和衰老等活性。抑制素在细胞周期的G1期中或是用一种线粒体蛋白合成抑制剂甲砜霉素处理时丰度较高。
细胞色素C氧化酶（COX）
是线粒体内膜上的蛋白复合体 。它参与ATP合成过程中所必须的质子转运及将氧气催化为水。大多数COX亚基都可以作为很好的线粒体标记物。
凋亡诱导因子（AIF、PDCD8）
是膜间腔中分子量为67 kDa的蛋白且表达广泛。在线粒体中，AIF作为一种氧化还原酶具有抗凋亡活性。然而在凋亡信号转导过程中AIF被释放到胞质中并转运至细胞核引起核凋亡。
己糖激酶
线粒体外膜上催化醣酵解第一个步骤的100 kDa激酶。己糖激酶使己糖（一种六碳糖）磷酸化，形成磷酸己糖（例如葡萄糖变为葡萄糖-6-磷酸）。
VDAC1
（线粒体外膜蛋白孔蛋白1）是己糖激酶和BCL2L1的线粒体外膜受体。
核标记物
有一些蛋白被用于区分不同的核结构。
染色质：
DNA通过缠绕在四种核心组蛋白（H2A、H2B、H3、H4-形成一个八聚体）上进行浓缩，从而形成核小体。组蛋白H1是一种结合在较远染色质区域并使之进一步压缩的蛋白连接因子。DNA和它的组蛋白以及其它结合在上面的蛋白（用于调控转录、复制、DNA修复等）一起统称为染色质。
因此，任意一种结合DNA的燃料都可以用做染色质标记物。例如，4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和染料Hoechst 33258和Hoechst 33342都是常用的。溴脱氧尿苷（BrdU）是一种用于检测增殖中的细胞的合成核苷。5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）染色也同样有效。
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