构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒

作者：张馨予

构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡

2022-06-21 14:30 来源: 中国组织工程研究

原标题：构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡

摘要：

构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒

文题释义：

Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5：是一种由运动诱导产生的肌肉因子，其本质是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，骨骼肌细胞及心肌细胞是其产生的主要来源。Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5经蛋白水解酶作用后剪切修饰形成鸢尾素(Irisin)，鸢尾素可以调节糖脂代谢、抑制炎症反应，抑制动脉粥样硬化进程，此外其可通过不同途径抑制细胞凋亡。

鸢尾素：是由Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5蛋白水解形成的一种多肽激素，由112个氨基酸构成，分子质量约12 kD，其在不同的物种间具有高度同源性。鸢尾素可以上调棕色化相关基因，并通过p38 MAPK和ERK信号通路促进白色脂肪棕色化，燃烧脂肪增加能量代谢，减轻体质量及改善胰岛素抵抗。血清内鸢尾素水平与2型糖尿病、非酒精性脂肪肝、慢性肾病、牛皮癣、骨质疏松症、高血压、动脉粥样硬化和癌症等主要慢性疾病之间存在明显的关联。

背景：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5是一种调节糖脂代谢的蛋白分子，可以调控细胞凋亡，且参与抑制动脉粥样硬化的进程。

目的：通过构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体，转染人脐静脉内皮细胞，验证Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5调控内皮细胞凋亡的作用。

方法：构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体。取处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞，分3组培养：空白组不进行慢病毒转染，对照组转染不含Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5基因的空载体慢病毒，实验组转染Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒，转染7 d后，采用RT-PCR和Western blot检测Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达。转染7 d后，向3组细胞内加入氧化型低密度脂蛋白溶液，采用CCK-8法测定细胞活力，Hoechst 33342/PI双染及流式细胞技术检测细胞凋亡程度。

结果与结论：①实验组Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达均高于空白组、对照组(P < 0.05)；②CCK-8检测显示，实验组加入氧化型低密度脂蛋白1，2 h的细胞活力高于空白组、对照组(P < 0.05)，3组加入氧化型低密度脂蛋白4 h的细胞活力比较差异无显著性意义(P > 0.05)；③加入氧化型低密度脂蛋白24 h后，流式细胞术检测显示实验组细胞凋亡率低于空白组、对照组(P < 0.05)，Hoechst 33342/PI双染显示实验组凋亡细胞数量少于空白组、对照组；④结果表明，过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5可以抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡。

缩略语：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5：fibronectin type Ⅲ domain containing 5，FNDC5

https://orcid.org/0000-0002-3788-8061 (欧航君)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5, 慢病毒, 转染, 人脐静脉内皮细胞, 凋亡, 动脉粥样硬化

引用本文: 欧航君, 赵广建, 潘裕佳, 龚才伟, 赵权威, 刘大男. 构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(2): 216-222.返回搜狐，查看更多