【抗体技术分享】免疫组化中2种应用最广泛的酶

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

2022-06-23 15:59 来源: 菲恩谈生物技术

原标题：【抗体技术分享】免疫组化中2种应用最广泛的酶

上期说完了免疫组织化学法组织准备的步骤和需要注意的事项，这期讲一讲酶标记步骤中两样用的最多的酶。如今许多种类的酶应用于免疫组织化学中,其中应用最为广泛的是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP）。

辣根过氧化物酶

HRP 的作用底物是过氧化氢，过氧化反应产物将色原氧化,在抗体结合的部位发生沉淀。在几种色原中,3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)是最常用的,可产生不溶于有机溶剂的棕色沉淀。如果内源性过氧化物酶活性很高或者黑色素含量较高时,DAB就不是最佳的选择,应选用其他色原或者碱性磷酸酶。另外一种过氧化物酶的色原,3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)产生红色沉淀,但该沉淀溶于有机溶液,因此必须在水溶性液体中封片。还有其他一些色原也可生成相似的红色沉淀且不溶于有机溶剂。4-氯-1-萘酚生成可溶于有机溶剂的蓝色沉淀。目前有几种不同的实验方法可增强 DAB终产物的颜色。

碱性磷酸酶

碱性磷酸酶（AP)是从小牛肠道组织中分离出来的,该方法的基本原理是水解含萘酚替代物类的磷酸盐,产生不溶性的萘酚衍生物,随后与合适的重氮盐结合,在酶活性部位生成带有颜色的不溶性偶氮染料。最常使用的色原为BCIP/NBT(蓝色,稳定介质)、固红(fast red)(红色,水性封固剂)、新品红(紫红色,水性封固剂)。碱性磷酸酶适用于细胞样品或内源性过氧化物酶较高的组织样品的免疫细胞化学法。碱性磷酸酶与辣根过氧化物酶可联合应用于双重免疫组化染色。

菲恩生物在hrp酶标领域有丰富的经验, 下图是hrp酶标二抗在IHC染色中的应用：

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