如何养好SH

作者：杨超月

SH-SY5Y细胞于1970年构建，是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后得到的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。如今，SH-SY5Y细胞已经是脑科学研究中最常用的细胞系之一了。

但很多人在SH-SY5Y细胞培养的过程中，总会遇到各种问题。今天，普诺赛来为大家一一解答。

SH-SY5Y细胞基本信息

如何养好SH

▲产品详情细胞系:SH-SY5Y 培养基:CM-0208

SH-SY5Y细胞培养常见问题及解决方案

收货篇

常温运输过程中，细胞不免受到震荡和温度变化的影响，出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。遇到这种情况，不用紧张，只要正确处理，细胞就能恢复正常生长。

收货时皱缩

常温细胞收货后，把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时即可。如果4小时后细胞仍然没有铺展开，密度适中的前提下可以静置过夜（过夜前倒出部分培养基，留5-10mL在瓶中，瓶盖拧松）。

收货时聚团

常温细胞收货后，先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态，再进行传代。传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

收货时脱落

常温细胞收货后，先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。脱落后的细胞通常聚团漂浮，通过离心将漂浮的细胞团收集起来，在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。

贴壁细胞常规方法消化下来，和处理好的脱落细胞合并，混匀后铺板。

SH-SY5Y脱落处理步骤：

1. 1200rpm（约250g）3min离心收集细胞，去除旧培养基；

2. PBS 重悬细胞，再次 1200rpm（约250g）3min离心，去除PBS；

3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重悬细胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；

4. 放入细胞培养箱约 1-3min；

5. 用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散；

6. 迅速加入 3-5mL含血清的培养基混匀以终止消化；

7. 1200rpm（约250g）3min离心，去除胰酶；

8. 加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中；

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SH-SY5Y细胞收货时皱缩、脱落

如何养好SH

SH-SY5Y细胞处理后第三天

SH-SY5Y细胞培养篇

SH-SY5Y细胞生长缓慢。在细胞培养过程中，有以下几点需要注意。

能否使用DMEM/F12

MEM/F12和DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y细胞培养，并且都有相应的文献支持。但这两种培养基培养出来的形态会有细微差异。另外，使用品质好的胎牛血清将极大改善细胞生长状态。

培养基容易变黄

因其神经母细胞瘤的特性，SH-SY5Y细胞成簇生长，饱和密度大。有时显微镜下看着密度不高，但细胞簇实际密度大，所以细胞培养基很快就变黄了。这时候，需及时换液。

生长异常缓慢

当SH-SY5Y细胞培养一周都无法传代时，可以将细胞消化下来，接种到更小的容器中，人为增加细胞密度，从而促进细胞生长。平时传代时也要注意接种密度不能太低。

传代注意事项

不建议连续消化细胞，连续消化细胞会导致细胞状态变差。传代时消化时间不宜过长，通常1-3min即可，若细胞解离太快可适当用PBS稀释胰酶。吹打细胞时，动作轻缓一些，减少对细胞的物理刺激。

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SH-SY5Y正常生长照片

形态篇

SH-SY5Y细胞培养时，贴壁细胞和悬浮细胞同时存在，贴壁细胞呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于成簇生长，容易成团。

悬浮细胞过多：SH-SY5Y细胞生长时有少量悬浮细胞，是正常现象。如果出现大量悬浮的细胞，就需要引起注意了。

处理方法：换液时将悬浮细胞离心收集，新鲜培养基重悬后接种回原瓶/原皿。当贴壁细胞生长状态良好、密度适中时，可以舍弃悬浮细胞。

成团严重：SH-SY5Y细胞非常敏感，在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下，有少量成团现象，无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时，就需要按以下方法特殊处理一下了。

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成团较严重的SH-SY5Y细胞

处理方法