写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上

作者：杨超月

写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上的应用

2022-04-08 18:51 来源: 梦想家聊生活

原标题：写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上的应用

应同写意邀请，恺佧生物客户应用总监谢宏林在“2022新型生物药先进技术峰会” 上做了《高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上的应用》的报告，本文系根据报告内容整理。

mRNA技术机会与恺佧平台

mRNA作为生物中心法则的一个中间角色，一直备受关注。2010年前后，LNP递送技术的突破，促进了mRNA的大发展，使其成为当下最具代表性的新技术之一。

mRNA的应用场景非常宽广，除了目前我们了解到的肿瘤疫苗、传染病疫苗（尤其是新冠）之外，mRNA未来的应用场景会逐渐向其他领域扩展，比如蛋白替代。因此，这里面也充满了不少机会。

写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上

恺佧生物成立于2018年3月，目前有近200名员工，80%从事生产研发。

在平台建设上，我们开发了独有的创新型功能重组蛋白和抗体研发生产SAMS™平台，以及分子克隆、细胞培养、蛋白纯化和质控平台、酶促反应分析平台、细胞功能评价平台，MES生产管理体系。

目前，我们已建有GMP车间、实验室和办公面积近5000平方米，一流的分析仪器和生产设备配置，以及即将投产的上万平方米上海临港二期GMP车间，使得我们具备过亿元订单年交付能力。截至目前服务超过250家生物医药和诊断客户，参与2000多个目录蛋白产品。

我们主要聚焦新兴治疗领域的关键上游原材料，除了mRNA疫苗。还包括抗体药发现I/O、基因治疗、细胞治疗等。

写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上

mRNA合成过程中使用的酶关键指标的质控，对下游企业的生产工艺稳定性至关重要。随着整个产业链的逐渐发展和成熟，未来对酶的要求也会逐渐提高。除了符合CGT领域原料酶的GMP申报要求，恺佧所有酶都经过高精确活性定量放行，比如特别引进了LC-MS系统对加帽酶和2'-O-甲基转移酶进行测活放行。

体外转录案例分享

从早期质粒的信息化，到mRNA的合成、加帽、加尾，整个过程需要一系列的酶。我们可以提供不同的选择方案。

写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上

首先一个产品是BsaI。这个酶在科研领域里有非常多的应用，应用时间也很长，但BsaI添加了BSA作为保护剂和稀释剂，在工业领域可能出现问题。因为BSA一般来自动物，即使采用重组的BSA，还是容易带来蛋白残留控制的压力。考虑到这两个痛点，我们直接通过优化配方摆脱BSA。

为了印证方法的可靠性，我们进行反复的冻融实验。我们将带BSA和不带BSA的酶进行对比，在37℃的环境下，30分钟的反应没有任何区别，持续到16小时继续观察无星活情况。可以看到，加不加BSA的效果是一样的。

我们还做了一个37℃的加速实验，也分别在30分钟和16小时的质粒酶切反应时间进行对比，考察其活力和星活情况。在前4天的37℃加速实验，活力基本上没有影响。第5天时稍微会有一点影响，但在实际的使用场景里基本不会发生，因为我们不太会把酶暴露在37℃环境下长达5天。

也就是说我们制剂配方的优化，很好的摆脱了BSA。

写意报告丨高活性GMP级别系列酶在mRNA疫苗生产上

其次是噬菌体T7，这可能是我们整个mRNA生产过程中最核心的一个酶，是非常高效的单结构蛋白。T7和细菌、真核生物对比，后二者分别有5个亚基、12个亚基。如果是这样的生产工具，单单生产和表达，难度、成本都会非常大。因此，T7是最理想的一个生产工具。

T7在科研领域也得到很长时间的应用，而工业领域对产量要求比较高，涉及疫苗生产成本。到达终端，则影响患者的可及性。