石蜡切片平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白（α

作者：张馨予

HEPENGBIO石蜡切片平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色试剂盒
产品说明书（中文版）

主要用途

HEPENGBIO石蜡切片平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括石蜡分离、抗原修复等，以及免疫抗体显色技术，即通过抗α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，从存档中的石蜡包埋的组织切片中分析α平滑肌肌动蛋白表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、大鼠、小鼠等石蜡包埋组织（肌肉、乳腺组织、子宫组织等）切片的平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白测定。广泛用于平滑肌细胞识别、分化、异常病变的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景

肌动蛋白（actin）在所有真核细胞普遍表达，高度保留的蛋白，构成细胞骨架的主要元素之一。肌动蛋白有6个亚型，在心肌、骨骼肌、平滑肌以及非肌肉细胞的胞浆中表达，调节收缩潜力、控制细胞的结构和运动。其中4个亚型成为肌肉组织细胞的分化标志。α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）是平滑肌细胞分化的标志。主要在血管平滑肌细胞表达，受到激素和细胞繁殖的调节。肿瘤转化和动脉粥样硬化会引起α平滑肌肌动蛋白表达异常。使用抗α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体可以识别在各种组织，包括乳腺、唾液腺、汗腺、支气管腺体、平滑肌、血管平滑肌、子宫基质、前列腺基质（stroma）细胞、周细胞（pericyte）、软骨细胞等正常或肿瘤组织的平滑肌细胞或α平滑肌肌动蛋白及其各种分化，包括成肌纤维细胞（myofibroblast）、肌上皮细胞（myoepithelial）等。通过抗α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示α平滑肌肌动蛋白细胞为棕褐色。

产品内容

HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）          150毫升
HEPENGBIO补水液A（Reagent B） 50毫升
HEPENGBIO补水液B（Reagent C） 50毫升
HEPENGBIO补水液C（Reagent D） 50毫升
HEPENGBIO补水液D（Reagent E） 50毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent F） 100毫升
HEPENGBIO酶解液（Reagent G）   2毫升
HEPENGBIO封阻液（Reagent H）   2毫升
HEPENGBIO一抗液（Reagent I）   1毫升
HEPENGBIO二抗液（Reagent J）   1毫升
HEPENGBIO显色液A（Reagent K） 500微升
HEPENGBIO显色液B（Reagent L）   5毫升
产品说明书   1份

保存方式

保存HEPENGBIO酶解液（Reagent G）、HEPENGBIO一抗液（Reagent I）、HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO显色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO显色液A（Reagent K），避免光照；有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

特别注意

1． HEPENGBIO显色液A（Reagent K）和HEPENGBIO显色液B（Reagent L）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉
2． HEPENGBIO显色液A（Reagent K）如果出现沉淀，须过滤后再用
3． 石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则组织易脱落

实验步骤

一、 脱蜡处理

1．取出10片待测的石蜡包埋的6微米厚组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2．按下表依次放进小染色缸里孵育 染色缸 孵育时间
50毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A） 15分钟
50毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A） 15分钟
50毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A） 15分钟
50毫升HEPENGBIO补水液A（Reagent B） 3分钟
50毫升HEPENGBIO补水液B（Reagent C） 3分钟
50毫升HEPENGBIO补水液C（Reagent D） 3分钟
50毫升HEPENGBIO补水液D（Reagent E） 3分钟

3．小心移去切片上的HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
4．小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
5．室温下孵育5分钟
6．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
二、 蛋白消解处理
1．小心加上200微升HEPENGBIO酶解液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
2．室温下孵育5分钟
3．小心移去切片上的HEPENGBIO酶解液（Reagent G）
4．室温下，将切片置入50毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分钟
5．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6．小心加上200微升HEPENGBIO封阻液（Reagent H），铺满整个切片样品表面
7．室温下孵育5分钟
8．小心移去切片上的HEPENGBIO封阻液（Reagent H）
9．室温下，将切片置入50毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分钟
10．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）

三、免疫标记处理

1．小心加上100微升含有HEPENGBIO一抗液（Reagent I），铺满整个切片样品表面
2．在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
3．小心移去切片上的HEPENGBIO一抗液（Reagent I）
4．室温下，小心将切片置入50毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）

四、 样本染色处理

在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO显色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取200微升HEPENGBIO显色液A（Reagent K）和1.8毫升HEPENGBIO显色液B（Reagent L）到2毫升离心管，充分混匀，标记为HEPENGBIO显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

1．小心加上100微升HEPENGBIO二抗液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
2．室温下孵育30分钟，避免光照
3．小心移去切片上的HEPENGBIO二抗液（Reagent J）
4．室温下，小心将切片置入50毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6．小心加上200微升含有HEPENGBIO显色液A（Reagent K）和HEPENGBIO显色液B（Reagent L）的HEPENGBIO显色工作液，铺满整个切片样品表面
7．室温下孵育5至30分钟，或直至样本出现棕褐色
8．小心移去切片上含有HEPENGBIO显色液A（Reagent K）和HEPENGBIO显色液B（Reagent L）的HEPENGBIO显色工作液
9．室温下，小心将切片置入50毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中浸泡5秒
10．小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
11．（选择步骤）进行甲基绿复染（注意：建议使用HEPENGBIO甲基绿复染试剂盒－HEPENGBIO40010）
12．放上盖玻片或封片
13．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色
注意事项

1．本产品为10次操作
2．操作时须戴手套，以防污染
3．石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
4． HEPENGBIO清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用
5．所有操作在室温下进行
6．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
7．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
8．细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间
9．细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察
10．本公司提供系列平滑肌细胞检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定显色清晰