人IER5基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴

作者：张馨予

摘要：目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达早期快速反应基因5(IER5)蛋白,为后续蛋白质结晶及探索蛋白质三级结构提供线索.方法:以HeLa细胞cDNA为模板扩增出IER5基因片段,构建重组转移质粒pFastBac1-IER5;重组转移质粒经双酶切及测序鉴定后转化至感受态细胞DH10Bac,以获得重组的穿梭质粒rBacmid-IER5;将重组穿梭质粒感染Sf9细胞,待细胞出现明显病变时收集重组杆状病毒;用间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western blot以及对表达产物进行分析鉴定.结果:重组转移质粒pFastBac1-IER5经双酶切后得到与预期相同的2条条带;重组穿梭质粒rBacmid-IER5经PCR鉴定在3300 bp左右出现一条特异性条带;间接免疫荧光结果提示IER5蛋白在Sf9细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示,表达产物的相对分子质量约为48 k,Western blot结果表明表达产物能与IER5抗体特异性结合.结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了人IER5蛋白,获得了体外表达重组IER5蛋白的相对分子质量、溶解性等物理化学特性.

英文标题 Expression and identification of human IER5 in an insect baculovirus expression system
关键字 IER5,Sf9细胞,杆状病毒表达系统,鉴定
作者熊强,姜晓燕,丁立新,刘晓丹,周平坤,丁库克
所属期刊栏目论著,
刊名癌变·畸变·突变,Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis
作者单位丁立新:中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所,丁库克:中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所,周平坤:军事医学科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京市放射生物学重点实验室,北京 100850,姜晓燕:中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所,熊强:中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所,刘晓丹:军事医学科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京市放射生物学重点实验室,北京 100850
DOI 10.3969/j.issn.1004-616x.2020.01.011
SSSN 1004-616X