PCR，为什么是检测鱼虾疾病，最强大的工具？分

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

PCR是有效控制疾病的方法，并且在水产养殖当中，得到广泛的应用。

PCR是一种有效的鱼虾病诊断技术。

一、什么是PCR？

PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，用于“扩增”生物体的DNA分子或者DNA分子片段，将初始DNA数量增加到所需的任意量，产生数千至数百万个特定DNA序列，最终可以进行比对。

PCR技术由Kary Mullis于1983年开发，是生物和医学研究实验室的常用技术。比如：遗传病和传染病的鉴别、血统测定、DNA测序等都可以使用PCR技术。

当PCR过程发生时，从原始模具DNA中产生的新DNA将继续用作模具，以合成下一个DNA分子，形成DNA样本呈指数放大的连锁反应链。PCR方法基于热循环，使用携带与目标DNA序列互补的序列的引物（它是一小段DNA）。

二、PCR的组成部分

PCR需要很多成分。那是：

样品：DNA包含要扩增的DNA片段。

引物：携带与待扩增DNA序列互补的序列。

DNA聚合酶：催化DNA的复制。

核苷酸：作为DNA聚合物酶的原料，以建立新的DNA。

缓冲溶液：为DNA聚合酶提供有利的环境。

三、PCR的原理

第一步：变形，使用热量打破2条DNA链之间的桥，将双链DNA分离成单链。

第二步：装上诱饵，根据添加原理（低温），将引物附着在刚刚分离的DNA单链上。

第三步：拉伸，DNA聚合酶附着在空链上，构建新的DNA。

这样，经过变性、装上诱饵和拉伸，DNA含量就能够实现增加一倍的目的。

四、PCR的常见类型？

RT-PCR（反转录PCR）：是一种将RNA的反转录酶（逆转录）结合成cDNA和特定DNA靶标的扩增的技术，达到扩增合成目的片段。主要用于临床研究和实验中的特异性RNA定量、基因表达分析和病毒RNA定量。

Nested-PCR（巢式聚合酶连锁反应）：一种改进的PCR技术，目的是在存在杂质时，在不需要的引物连接到DNA链的情况下，减少PCR结果出现错误。使用2组引物：引物1将与DNA配对以合成新链。引物2将与新合成的链（第一个PCRsp）配对，以根据需要合成新链。该技术将检测病原体的存在，即使数量非常少，也可以检测出来。

LAMP-PCR(环介导等温扩增)：基于将4种类型的引物配对到目标基因上的6个特定位置进行工作。结果是包含多个具有不同靶标和大小的DNA序列的双链DNA的混合物。这种方法非常简单且便宜。阳性结果基于对Mg-吡啶磷酸盐的沉淀反应，将在紫外线下发光。