提取外周血DNA实验步骤

作者：张馨予

提取外周血DNA实验步骤

实验目的：提取血液样本，或者唾液、血清等体液的DNA。

实验步骤：

一，样品准备

1. 吸取250ul血液至无菌1.5ml的EP管，加入25ul的OB蛋白酶以及250ul的Buffer BL（如下图），涡旋15s充分混匀。

2. 水浴锅水浴10min（65℃）。

3. 加260ul无水乙醇，涡旋充分混匀。

二，收集及洗涤DNA

1.将上述得到的溶液全部移到DNA Mini结合柱中（如下图），10000g离心1min。

2. 弃收集管和滤液，将合柱套在新的收集管中，加入500μlHBCBuffer（如下图）至DNAMini结合柱中，10,000xg离心1min。

3. 将结合柱套在同一个收集管中，加入700μlDNAWash buffer（如下图），至DNAMini结合柱中，10,000xg离心1min。

4. 重复以上步骤进行二次洗涤。

5. 再次将结合柱套在同一个收集管中，离心（10,000xg,2min）以干燥DNAMini结合柱。

三,洗脱DNA.

1. 将DNAMini结合柱套在1.5mL灭菌EP管，加入100µ l65℃预热的ElutionBuffer（如下图），室温静置5min。

2.室温下，离心（13000g，2min），洗脱DNA.

3.重复以上两步骤洗脱DNA，提高DNA产量。

四，储存DNA.

提取好的DNA测DNA浓度，并储存在-20℃中进行保存。

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