私家秘方！手把手教你一键搞定PCR的计算！好用

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

私家秘方！手把手教你一键搞定PCR的计算！好用到飞起！

2021-12-23 12:21 来源: Happy Eng Class

原标题：私家秘方！手把手教你一键搞定PCR的计算！好用到飞起！

qPCR一键出图

小伙伴们，大家好！在这个浪漫的冬至里，我们又如约见面啦！小洋作为地地道道的北方人，在冬至这一天，一顿热乎乎的饺子那必须得安排的明明白白！不知道屏幕前的小伙伴们，在你们的家乡，冬至节气里都吃些什么呢？欢迎小伙伴们在推送下方给小洋留言哦~伴随着饺子的香气，让我们开始今天的学习吧！本期小洋给大家带来的是关于如何利用仙桃工具来进行qPCR分析与可视化的相关介绍。

小洋的单图复现系列传送门

最难最好用的临床预测分析，最简单的零代码教你搞定！今天给你扒一扒！

简单多变的雷达图！十分钟教你学会！让导师刮目相看的神技能！进来学！

零代码搞定临床预测分析有多简单？也就是3分钟....教你装逼新技能！

5分钟！零代码教你搞定CNS级别的美图！90%以上生信SCI中都会遇到！

太绝了！临床研究加上这个图，等着被导师夸吧！一眼吸睛！

真的！没想到7+SCI最爱的美图这么容易复现！零代码，学不会算我输！

3分钟掌握这俩生信图表，90%以上国自然标书用的上！零代码轻松掌握！

好方便好简单！筛选分子的N种姿势！这样设计课题才不会翻车！

生信小白莫慌！一站式GEO数据挖掘教程来啦！零代码也能搞定生信SCI！

GEO数据库简介

qPCR：荧光定量 PCR，在 DNA 扩增反应中，通过加入荧光化学物质，监测每次聚合酶链式反应循环后的总量，通过内参法对目标分子进行表达定量的方法。

一般在一次实验中，会同时设置对照组和实验组（或者多个实验组），每个组内分别检测内参分子和目标分子（可多个目标分子），每个组会设置多个样本（生物学重复），每个样本会设置多个复孔。上机完成后，会得到每个复孔对应的Ct值。

定量靶标分子的表达过程： 1. 计算每个样本每个基因对应的Ct均值（每个组、每个样本、每个基因的复孔Ct均值）。 2. （每个组、每个样本、靶标分子的 Ct 值）减去（同一个样本内参分子的Ct值），得到每个组每个样本靶标分子的∆Ct值。 3. 单独计算（上一步）对照组所有样本中靶标分子的∆Ct算术均值。 4. （每个组每个样本靶标分子的∆Ct值）（第二步）减去（对照组所有样本中靶标分子的∆Ct 均值）（第三步），得到每个组每个样本靶标分子的∆∆Ct值。 5. 由第4步得到的每个组每个样本靶标分子的ΔΔCt 值，经过2^-ΔΔCt计算，最终得到靶标分子在每个组每个样本对应的相对表达量。

应用场景

qPCR 上机后得到Ct 值，对分子进行定量分析。

结果解读

私家秘方！手把手教你一键搞定PCR的计算！好用

每个柱子代表一个分组

左图为单个分子在对照组和实验组中的相对表达均值情况（2^-ΔΔCt）可以看到GeneA 分子在实验组中相对低表达，差异具有统计学意义（p <0.001）。

右图为两个分子分别在对照组和实验组中的相对表达均值情况（2^-ΔΔCt）可以看到GeneA 分子在实验组中相对低表达，差异具有统计学意义（p < 0.001）；GeneB 分子在实验组中相对高表达，差异具有统计学意义（p<0.01）。

以上就是有关qPCR的背景介绍，如果想要进一步掌握qPCR的相关内容，还可以登录解螺旋官方网站进行深入的学习和探索！

实战演练

下面让我们来看一篇2021年7月发表在“ Journal of Orthopaedic Surgery and Research（ IF= 2.359）杂志上的一篇文章。题名为“ Identification of hub genes in rheumatoid arthritis through an integrated bioinformatics approach”.

私家秘方！手把手教你一键搞定PCR的计算！好用