百萤教您选择正确的ROS探针（一）

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

百萤教您选择正确的ROS探针，正确的选择让实验不再迷茫。活性氧（ROS）是化学反应性的含氧化学物质，其作为细胞代谢的副产物而产生。在动物细胞中，ROS的产生通常发生在线粒体中。在植物细胞中，ROS也可以在叶绿体中产生。最近，已显示ROS在过氧化物酶体和各种细胞类型的质膜氧化酶中产生。

百萤教您选择正确的ROS探针（一）

当过量产生时，ROS一直被认为会导致细胞大分子如DNA，脂质和蛋白质的损伤。从整体上讲，这是由细胞的氧化应激状态表示的。这种应激状态与细胞过程如细胞凋亡有关，而且在宏观上更像是在许多人类疾病的发病机制中发挥作用。

由于其具有破坏性的影响，细胞有几个精心调节的系统来管理过量的ROS。最充分研究的系统是谷胱甘肽 - 抗坏血酸循环，其使用NADH和NADPH作为电子供体将H2O2解毒为H2O。其他系统包括酶，例如超氧化物歧化酶，其催化超氧阴离子（O 2- ）歧化成O 2或H 2 O 2，和过氧化氢酶，其催化H 2 O 2分解成H 2 O和O 2。

ROS对细胞的利与弊导致它们早已被广泛的研究了，但是最近研究已经研究了ROS在细胞信号传导中的作用。在控制量方面，ROS已被证明可调节基因活化。然而，出现这种情况的具体机制仍有争议。ROS可能与特殊受体结合，这些受体启动信号级联，导致基因调控。 ROS也可能通过调节蛋白质磷酸化直接修饰这种信号级联中的蛋白质。

既然ROS对细胞作用如此之大且类型繁多，那么如何才能正确的选择探针对ROS进行检测呢？

检测目标作用目标探针货号原理

过氧化氢（H2O2）

许多酶促ROS清除途径的产物。最充分研究的是超氧化物歧化酶活性，其催化超氧阴离子还原为过氧化氢。

活细胞

DCFH-DA

15204

探针进入细胞，其中酯酶裂解双乙酸酯基团。然后DCFH被过氧化氢氧化成DCF并在激发时发出绿色荧光

二氢罗丹明123

15206/15207

探针被动地渗透细胞膜。通过过氧化氢氧化产生罗丹明123，其在激发时发出蓝色荧光

OxiVision™ Blue

11504/11505

探化氢氧化，激发时产生荧光针渗透细胞并被细胞内过氧

OxiVision™ Green

11503/11506
细胞提取物

Amplite™荧光过氧化氢检测试剂盒（红色）

11501

过氧化氢依赖氧化ADHP（同义词：10-乙酰基-3,7-二羟基吩恶嗪，Amplex®Red）通过辣根过氧化物酶（HRP）将ADHP转化为试卤灵。可以使用比色法或荧光法检测试卤灵

Amplite™比色过氧化氢检测试剂盒

11500

Amplex™红色过氧化氢/过氧化物酶检测试剂盒

辣根过氧化物酶（HRP）对过氧化氢IR的过氧化氢依赖性氧化产生活化的探针。激发会发出近红外荧光信号

Amplite™荧光过氧化氢检测试剂盒（红外光）

11502
检测目标作用目标探针货号原理

超氧阴离子（O2-）

有氧代谢的副产物，如线粒体呼吸（特别是复合物I和复合物III）

活细胞/细胞提取物

lucigenin（光泽精）

21259

通过转化为光泽精阳离子基团激活光泽精。光泽精阳离子自由基与超氧阴离子反应生成二氧杂环丁烷中间体，其分解为N-甲基吖啶酮。 N-甲基吖啶酮中的高能电子降低能量状态，导致发光

Coelenterazine（腔肠素）

21150

超氧阴离子的氧化导致激发的电子态。在衰变到基态电子配置时，光子作为发光释放

Luminol（鲁米诺）

11050

超氧化物依赖性酶催化鲁米诺的氧化导致发光

Hydroethidine（二氢乙锭）

15200