亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的检测方法评价及人群调查

作者：张馨予

目的对实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR)检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)进行方法学评价,同时进行大规模的人群MTHFR C677T基因多态性调查.方法 RT-PCR方法检测结果与测序法比较来验证准确性.将同一份标本分20天检测20次,以Cp值的变异来检测该方法的精密度.用FQ-PCR方法与聚合酶链反应-限制性酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法同时检测50例患者的MTHFR C677T基因型进行方法学比对.验证FQ-PCR方法的线性范围.以FQ-PCR方法对人群MTHFR C677T基因多态性进行大规模调查.结果 FQ-PCR方法与测序法100％符合.批内、批间精密度的变异系数分别为1.38％、1.48％.FQ-PCR在6.2×102 ～6.2×104pg/μl浓度范围内具有良好的线性.两种方法的比对结果没有统计学差异.人群调查发现MTHFR C677T基因型CC、C/T、TT频率在男女性别中分别为41.8％、30.9％、27.3％和38.3％、32.2％、29.5％,等位基因的频率分别为57.2％、42.8％和54.4％,45.6％.性别之间基因型频率和等位基因频率没有统计学差异.结论 FQ-PCR方法可以替代测序法和PCR-RFLP方法,是一种快速、便捷、准确、稳定的检测MTHFR基因多态性的方法,适用于大规模的检测.