【评测】常用免疫细胞培养基

作者：杨超月

TheraPEAK™ X-VIVO™ x-vivo™系列免疫细胞无血清培养基

编辑

免疫细胞在细胞和基因治疗中有着非常广泛的应用，无血清培养基是免疫细胞培养中一个非常关键的环节。在整个过程中，免疫细胞培养基的安全性和一致性尤为重要，在短时间内获得高产量和高质量的效应细胞，成为细胞和基因治疗的重要步骤。基于此，Lonza开发了 X-VIVO系列免疫细胞无血清培养基产品。

X-VIV010无血清免疫aOHQiS养基

为LAK细胞在无血清环境传代而设计。可培养众多细胞：

•PBL、NK、LAK、T细胞、造血干细胞、巨噬细胞和单核细胞；

•含重组人胰岛素、人转铁蛋白和白蛋白；

,蛋白浓度1000ug/mL

X-VIV015无血精免疫细胞培养基

支持由外周血和人肿瘤分离纯化的CD3+细胞的增殖，以及：

•PBL、DC、CIK、NK、LAK, TIL、T细胞、造血干细胞、巨噬细胞、单核细胞、淋巴细胞、粒细胞、

HUT-78和相关的人淋巴细胞细胞系；

•含重组人胰岛素、人转铁蛋白和白蛋白；

•蛋白浓度2000ug/mL

X-VIVO 20无dn清免疫细胸培养基

支持由外周血和人肿瘤分离纯化的CD3+细胞的增殖，以及：

•PBL、DC、CIK、NK、LAK、TIL、T细胞、造血干细胞、巨噬细胞、单核细胞、淋巴细胞、粒细胞、

HUT-78和相关的人淋巴细胞细胞系；

•含重组人胰岛素、人转铁蛋白和白蛋白；

•蛋白浓度2000ug/mL

所有X-VIVO系列培养基药物主文件已提交至FDA

编辑

Primary human CD4 and CD8 T cells were mixed at a 1:1 ratio, activated with CD3/28-coated beads, and cultured in RPMI, AIM V CTS and X-VIVO™ 15 with no serum (circles) and with serum (squares). The population doubling rate was measured by cell counting on the days indicated by a symbol. Error bars represent SEM.Adapted from Medvec R.et al.Improved Expansion and In Vivo Function of Patient T cells by a Serum-Free Medium. Molecular Therapy: Methods & Clinical Development. Volume 8, P65-74. March 2018. https:// doi.org/10.1016/j.omtm.2017.11.001 ,CC BY 4.0.

为满足细胞治疗行业对于安全性和高标准生产的需要，LONZA公司的X-VIVO系列提供两种类型的培养基：所有的TheraPEAK™ X-VIVO™培养基均根据医疗器械法规(包括21 CFR Part 820 )进行生产，生产工厂已通过FDA的IS。13485认证质量管理体系注册。用于进一步生产用途的GMP配方不含抗生素、不含酚红, 均标记FFM (For Further Manufacture)o用于科研使用的培养基含抗生素和酚红，仅标记RUO(Research Use 0nly)。

北京泽平lonza近十年代理商，大量现货，请搜索“泽平科技”进入咨询报价。

RUO和FFM两种类型IS养基的区別:

编辑

X-VIVO部分参考文献

Nature Biotechnology (2019). doi: 10.1038/s41587-019-0325-6

Polymer-stabilized Cas9 nanoparticles and modified repair templates increase genome editing efficiency. (聚合物稳定的Cas9纳米IR粒和修饰的修复模板可提高基因组编辑效率)

作者：Nguyen, D. N.1,2 , Roth, T. L.,2, et al.

单位：1.Department of Medicine, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA.

2.Department of Microbiology and Immunology, University of California, San Francisco, San Francisco, CA, USA.

IBS：我们报告了两个提高临床相关原代细胞类型中基于CRISPR-CAS9的基因组编辑效率的改进。添加在同源定向修复(HDR)模板末端的Cas9靶序列(TCTS)与Cas9核糖核蛋白(RNP)相互作用，将模板递送到细胞核，使 HDR效率提高约2-4倍。此外，使用聚谷氨酸将Cas9RNPs稳定为纳米颗粒，进一步将编辑效率提高了近两倍，降低了毒性，并使冻干储存不会失去活性。将这两项改进结合起来，即使在减少HDR模板剂量的情况下也可以提高基因编辑效率，在不同细胞类型的多个基因组位点产生大约两到六倍的活性编辑细胞，如CD3+ T细胞、CD8+T细胞、 CD4+T细胞、调节性T细胞(Treg)、y 5T细胞、B细胞、自然杀伤细胞以及原代和诱导的多能干细胞衍生的造血干细胞。

简要试验方法：

细胞扩增：分离CD4+, CD8+, CD3+T细胞，调节性T细胞(CD4+ CD127|OW CD25+), y 5 T细胞，B细胞， NK细胞进行扩增。购买商业化CD34+造血干细胞进行扩增。

-T细胞培养基：X-VIVO 15, 5% FBS, 50卩M 2-統基乙醇,10 mM N-乙酰半胱氨酸，300 U/mL IL-2, 5 ng/ mL IL-7,和 5 ng/mL IL-15；

-B 细胞培养基：IMDM, 5% FBS, 100 ng/mL MEGACD40L, 1000 ng/mL CpG, 500 U/mL IL-2, 50 ng/mL IL- 10, 和 10 ng/ml IL-15；

-NK细胞培养基：X-VIVO 15, 5% FBS, 50卩M 2-疏基乙醇，10 mM N-乙酰半胱氨酸，300 U/mL IL-2, 5 ng/mL IL-7,和 5 ng/mL IL-15；

转染：将HDR模板与RNPs混合并孵育至少5分钟，然后与细胞混合，利用Lonza 4D核转染系统96孔模块， P3核转染试剂盒，进行转染。

-T细胞，NK细胞，B细胞按照每个样本0.5-1 x伸个细胞进行电转，核转染条件EH-115；

-外周血来源CD34+造血干细

胞，核转染条件ER-100；

-IPS衍生的CD34+造血干细

胞，核转染条件EY-100。

转染后加入80ul培养基，孵育

10-20分钟，转移到培养体系中。

编辑