寡核苷酸吸附强？ACQUITY Premier来帮忙

作者：张馨予

近年来，核酸药物获批上市呈加速趋势。多款药物已批准上市，并且多款潜在的重磅产品也公布了激动人心的临床数据，这使得市场对核酸药物生物分析的需求激增。

然而，分析核酸药物的LC-MS生物分析方法在开发中存在诸多挑战。主要原因是寡聚核苷酸类化合物的聚阴离子特殊性质容易被吸附到金属材质表面，导致出现峰形不佳、分析物回收率和重现性等问题，最终限制分析方法的总体性能。科学家们也可以使用传统方法，利用高浓度寡核苷酸对液相色谱系统进行钝化或在流动相中使用EDTA等螯合剂来改善其吸附作用。但这些方法均有各自的局限性，不能从根本上解决问题。

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图1. ACQUITY Premier色谱系统

沃特世新推出的ACQUITY Premier色谱系统采用Max Peak高性能表面技术，专为防止因离子相互作用引起的非特异性吸附而设计，能够显著改善寡聚核苷酸的峰形、回收率以及分析方法的重现性，且无需进行系统或色谱柱钝化。下面就让我们挑战高难度，看看ACQUITY Premier在测试吸附性超强的全硫代磷酸化寡核苷酸反义药物GEM 91和寡聚脱氧胸苷中的表现吧！

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图2. 全硫代磷酸化寡核苷酸反义药物GEM91

01明显增强峰响应

通过比较标准ACQUITY C18寡核苷酸分析专用柱+标准ACQUITY UPLC系统和ACQUITY Premier色谱柱+ACQUITY Premier系统发现，后者的寡核苷酸回收率（峰面积/峰高）明显提升。图1和图2分别展示了GEM 91和20 mer寡聚脱氧胸苷的结果。从图中可以看出，完全硫代磷酸化寡核苷酸GEM 91表现出非常优异的累积回收率提升（超过后者12倍）。

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图3. 标准ACQUITY UPLC I-Class系统和标准UPLC色谱柱对比。

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图4. 使用ACQUITY Premier系统和ACQUITY Premier色谱柱对20 mer寡聚脱氧胸苷分析展现出更高的色谱性能。

02显著改善峰形

虽然采用ACQUITY Premier色谱柱时，观察到评估的所有寡核苷酸中峰拖尾有所减小。但是将ACQUITY Premier系统与ACQUITY Premier色谱柱结合使用后，观察到35 mer寡聚脱氧胸苷分析的色谱性能得到更显著的改善。

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图5. 使用ACQUITY Premier系统改善35 mer寡聚脱氧胸苷的峰形。

03进一步提升定量性能

依据小分子生物分析方法开发指南[1,2]，开发的分析方法必须能够证明线性(相关系数或R2≥0.98)、准确度(±15%)和精密度(±15%)。使用ACQUITY Premier色谱柱与标准ACQUITY UPLC系统（图6A）即可满足这些标准。将ACQUITY Premier系统与ACQUITY Premier色谱柱结合使用后，可以看到GEM 91的定量性能有进一步提升（图6B）。

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图6. ACQUITY UPLC I-Class(A)与ACQUITY Premier(B)系统定量分析后加标提取血浆中GEM91的性能比较。

04出色的定量下限

该分析方法对后加标提取血浆的定量下限（LLOQ）达到50 ng/mL。

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图7. 使用ACQUITY Premier系统和ACQUITY Premier色谱柱实现了GEM91的高灵敏度定量与检测，在后加标提取血浆中的LLOQ达到50 ng/mL。

05更好的重现性