掌握罕见靶点检测方式，为NSCLC精准治疗铺路！

作者：杨超月

　　近十年来，伴随着精准医学的不断发展，肺癌的诊疗已发生翻天覆地的变化。得益于晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的靶向治疗所取得的长足进展，NSCLC患者的总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）得到显著延长，客观缓解率（ORR）得到显著改善，生活质量也得到大幅提升，肺癌初显“慢病化”可能。

　　正所谓“精准治疗，检测先行”，分子分型是进行NSCLC靶向治疗的前提。因此，选择准确、快速、恰当的检测方法，全面筛选出适用靶向药物的目标人群，尤其是存在罕见突变的NSCLC人群，具有重要的临床意义。

　　当前，NSCLC罕见靶点主要包括ALK、MET、ROS1、HER2、BRAF、RET、KRAS、NTRK等。这其中发生率较高的罕见靶点是ALK靶点，临床上优先推荐应用 IHC‑VentanaD5F3进行ALK检测。当怀疑检测标本有质量问题时，优先应用FISH检测。当和其他基因（如EGFR、ROS1等）一起检测时，可以进行实时定量聚合酶链式反应（qRT‑PCR）或二代测序（NGS）检测[1]。

　　那么，发生率相对更低的MET、ROS1等罕见靶点该如何检测？有哪些注意事项？《非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）》给出了答案，诸多干货内容小编带您盘一盘！

　　罕见靶点MET如何进行基因检测？

　　《非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）》中明确指出，MET靶点的基因检测目前主要关注MET 14号外显子跳跃突变和MET扩增的检测。

　　MET基因变异的常用检测方法

　　MET 14号外显子跳跃：MET 14号外显子跳跃突变的检测方式主要包括NGS或qRT‑PCR，两者均可直接检测缺失MET 14号外显子的mRNA，NGS还可在DNA水平上进行检测[1]。

　　MET扩增：荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是检测MET扩增的标准方法；此外，NGS也可用于MET扩增检测，并可同时检测MET突变和融合等其他变异，且能实现多基因共检，在临床实践中应用更广[1]。

　　MET基因检测临床实践常见问题及解决策略

　　MET 14号外显子[1]跳跃突变：MET 14号外显子跳跃突变通常可与其他驱动基因变异同时检测；对于其他驱动基因变异阴性的患者，可单独检测MET 14号外显子跳跃突变。进行MET 14号外显子跳跃突变检测是需根据可及的检测平台、标本质量及标本类型，合理选择不同的检测方法。当组织标本不可及时，血浆标本可作为补充样本。

　　有研究显示，RNA-NGS检测的准确度和突变检出率高于DNA-NGS[1]，这可能与DNA-NGS基因探针覆盖范围不够有关。《非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）》建议DNA-NGS检测应尽量涵盖第14号外显子外，如第13或14号内含子上可能发生剪切变异的区域；而RNA-NGS检测在临床实践中应注重mRNA质量，在检测前应做好质控，如发现mRNA已经降解建议重新取材检测[1]。

　　罕见靶点ROS1如何进行基因检测？

　　《非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）》中强调，ROS1基因重排是较为常见的ROS1基因变异，目前共发现十余种ROS1基因融合伴侣。

　　ROS1基因变异的主要检测方法

　　FISH检测是检测ROS1重排的“金标准”；qRT‑PCR用于ROS1融合基因检测具有较高的灵敏度和特异度，并且可与ALK联检；NGS检测ROS1基因变异既可在DNA水平上检测重排序列，也可在mRNA水平检测融合序列，但可能存在假阴性[1]。

　　ROS1基因检测临床实践常见问题及解决策略

　　免疫组化（IHC）检测ROS1蛋白表达，用于初筛ROS1融合。临床应用前，实验室应经过严格的检测流程、判读标准、质量控制和保证，阳性病例需经过其他技术平台进行验证。在进行 FISH、qRT‑PCR 及NGS检测结果判读时，对于检测结果不能确定、信号不典型或者位于临界值的患者，应建议使用其他技术平台进行检测。当和其他基因（如EGFR、ALK等）一起检测时，可以进行qRT‑PCR或NGS检测[1]。

　　HER2、BRAF、KRAS、RET、NTRK等罕见靶点如何进行基因检测？

　　除了上述靶分子外，NSCLC的重要驱动基因变异还包括HER2基因突变或扩增、BRAF突变、KRAS 突变、RET 基因重排、NTRK 家族基因重排等，均是潜在的治疗靶点[1,3]：

　　①作为酪氨酸激酶受体ERBB家族成员之一，HER2基因突变或扩增是NSCLC的驱动基因之一，约占NSCLC的2%~4%，其中最常见的基因变异为HER2外显子20插入性突变；

　　②BRAF突变易发生在吸烟的肺腺癌患者，与患者预后差、耐药等相关，占NSCLC的1%~2%。BRAF突变可导致MAPK/ERK信号通路异常活化，常见突变位点为V600；

　　③RET突变约占NSCLC的1%~4%，最常见的RET基因融合伴侣为 KIF5B（70%~90%）和CCDC6（10%~25%）；

　　④NRG1/2及FGFR2在NSCLC中的发生率均

　　⑤NTRK融合基因在 NSCLC 中罕见，发生率小于 0.1%。

　　《非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）》指出，目前，HER2、BRAF、KRAS、RET、NTRK等罕见靶点的检测方法主要参照基因点突变、基因重排类型的检测方法和检测策略，更多经验尚需在临床实践中不断积累[1]。

　　精准治疗的医学理念下，靶向药物治疗肺癌所取得的巨大临床获益离不开基因检测的正确指导。未来期待更多罕见靶点突变NSCLC患者可以通过基因检测手段明确驱动基因亚型，进而接受对应的靶向抑制剂治疗，获得长期生存！

　　参考文献：

　　[1]. 中华医学会病理学分会,国家病理质控中心,中华医学会肿瘤学分会肺癌学组,中国抗癌协会肺癌专业委员会,中国胸部肿瘤研究协作组.非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南(2021版)[J].中华病理学杂志.2021;50(04):323-332.

　　[2]. Subramanian J, Tawfik O. Detection of MET exon 14 skipping mutations in non-small cell lung cancer: overview and community perspective[J]. Expert Review of Anticancer Therapy, 2021, 21(8): 877-886.

　　[3]. Chen J, Yang H,Teo A, et al. Genomic landscape of lungadenocarcinoma in East Asians[J]. Nat Genet, 2020,52(2):177-186.

　　本材料由阿斯利康提供，仅供医疗卫生专业人士参考

　　CN-94828