【酶促反应动力学实验报告】酶促反应动力学实

作者：张馨予

篇一：酶促反应动力学实验

实验酶促反应动力学

————蔗糖酶米氏常数的测

【目的要求】

1．了解酶促动力学研究的范围。

2．以蔗糖酶为例，掌握测定米氏常数(Km)

【实验原理】

在酶促反应中，当反应体系的温度、pH和酶浓度恒定时，反应初速度(v)则随底物浓度[S]的增加而加速，最后达到极限，称为最大反应速度(v)。Michaelis和Menten 根据反应速度与底物浓度的这种关系，推导出如下方程：

v?V[S] km?[S]

此式称为米氏方程，式中Km称为米氏常数，按此方程，可用作图法求出Km。方法有：

1．以v[S]作图

由米氏方程可知，v=V／2时，Km＝[S]即米氏常数值等于反应速度达到最大反应速度一半时所需底物浓度。因此，可测定一系列不同底物浓度的反应速度v,以v对[S]作图。当v＝V／2时，其相应底物浓度即为Km。

2．以1／v对1／[S]作图

取米氏方程的倒数式：

1km11??? vV[S]V

以1／v对1／[S]作图可得一直线，其斜率为Km／V，截距为1/V。若将直线延长与横轴相交，则该交点在数值上等于—l／Km。

酶促反应动力学实验

本实验以蔗糖为底物．利用一定量蔗糖酶水解不同浓度蔗糖所形成的产物(葡萄糖和果糖)的量来计算蔗糖酶的Km值。葡萄糖和果糖能与3，5—二硝基水杨酸试剂反应，生成桔红色化合物，可于520nm处比色测定之。

【试验材料】

1．试剂

(1)标准葡萄糖溶液：准确称取100mg葡萄糖溶于少量饱和的苯甲酸溶液(0.3%)，再转移到 1

100ml容量瓶中，用饱和苯甲酸溶液稀释到刻度，混匀，即得浓度为1mg／m1的标准葡萄糖溶液。冰箱贮藏可长期保存；

(2)pH4.5的0.1mol/L醋酸缓冲液：取lmol/L醋酸钠溶液43m1及lmol／L醋酸溶液57m1，稀释至1000m1即得；

(3)pH4.5的10％蔗糖溶液：准确取l0g蔗糖溶于少量pH4.5的0.1mol／L醋酸缓冲液，转移到100ml容量瓶中，用同样缓冲液稀释到刻度备用；

…… …… 余下全文

篇二：实验五酶促反应动力学实验

实验五酶促反应动力学实验

——温度和离子对酶活性的影响

【实验目的】

1、了解温度对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。

2、了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。

【实验原理】

1、每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，

若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久丧失；而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分的恢复其活性。

2、酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的

激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。其它的阴离子，如Br-、NO3-和I- 对该酶也有激活作用，但较微弱。而Cu2+对唾液淀粉酶具有抑制作用。激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。

就本实验，低浓度CI-可以增加酶活性，高浓度的CI-或者低浓度的Cu2+则会抑制酶活性，同时低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。激活剂的作用机制是多种多样的，可能是作为辅酶或辅基的一个组成部分，也可以直接作为酶活性中心的构成部分。

【实验用品】

1、仪器和器材：冰箱、恒温水浴锅、紫外分光光度计、试管和试管架、移液

枪及枪头、胶头滴管、烧杯

2、试剂：1)PH6.8的缓冲液：量取15.45ml的0.2M磷酸氢二钠和4.55ml

的柠檬酸混合摇匀即可。

2)0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，

溶于100ml蒸馏水（需加热）。

3)碘液

4)1M HCl溶液

5)1M NaOH溶液

6)稀释100倍的唾液

7)冰水浴

8) 1%NaCI溶液

9) 0.1%CuSO4溶液

10)0.1%淀粉液

【实验内容】

（一）温度对酶活性的影响

1．制管和预温：

由于本实验对恒温反应要求较高，故每个温度梯度使用两支试管，分别标记为A管和B管，同时欲温底物与酶。A管加入PH6.8的缓冲液和0.5%淀粉液；B管使用移液枪加入稀释100倍的唾液，相对应的两支试管置于设定的温度下预温5min。

…… …… 余下全文

篇三：酶促反应动力学实验

“蛋白酶凝乳特性研究”

1.实验目的

通过研究胃蛋白酶、木瓜蛋白酶作用于脱脂乳的最适凝乳温度、最适pH值、以及金属离子对酶凝乳效果的影响，使学生掌握酶学研究的基本方法，从而掌握生物化工研究的一些基本理论和主要思路，为科研开发打下必要的基础。 2.实验原理