1楼

这个帖子发布于16年零165天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

AMV逆转录酶和M-MuLV在应用上有什麽区别？我想RT一段480bp的片断，我的总RNA量（大概106个小鼠单个核细胞）不是太多，不知用哪个酶好一些？是不是M-MuLV逆转录酶都没有Rnase H活性？Rnase H活性对我的片段逆转录会有影响吗？  

不知道邀请谁？试试他们

2004-06-22 10:12 浏览 : 4378 回复 : 2

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2楼

常用的逆转录酶有两种：来自鸟类成髓细胞瘤逆转录病毒称为AMV-RT；来自鼠白血病毒称为M-MuLV。
RNase H缺陷型莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反转录酶是一种RNA介导的DNA聚合酶。该酶能以RNA（合成cDNA时）或单链DNA做模板由引物起始合成一个互补的DNA，RNase H活性的缺失增强了该酶合成长链cDNAs的能力。M-MuLV逆转录酶RNase H区域含一个点突变，使修饰后酶的RNase H活性缺失。  

2004-09-01 12:04

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3楼

所有合成cDNA 第一链的方法都要用依赖于RNA 的DNA 聚合酶(反转录酶)来催化反应。目前商
品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化
的Moloney 鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶。AMV 反
转录酶包括两个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA 的DNA 合成,依赖于DNA 的
DNA 合成以及对DNA:RNA 杂交体的RNA 部分进行内切降解(RNA 酶H 活性)。MLV 反转录酶只有单
个多肽亚基,兼备依赖于RNA 和依赖于DNA 的DNA 合成活性,但降解RNA NA 杂交体中的RNA 的能
力较弱,且对热的稳定性较AMV 反转录酶差。MLV 反转录酶能合成较长的cDNA(如大于2-3kb)。AMV
反转录酶和MLV 反转录酶利用RNA 模板合成cDNA 时的最适pH 值,最适盐浓度和最适温室各不相同,
所以合成第一链时相应调整条件是非常重要。  

2004-09-03 15:57

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