荧光标记增强绿色荧光蛋白质粒pEGFP/荧光标记增

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

荧光标记增强绿色荧光蛋白质粒pEGFP/荧光标记增强绿色荧光蛋白EGFP

2022-08-23 11:43 来源: 本特利的小脑袋瓜

原标题：荧光标记增强绿色荧光蛋白质粒pEGFP/荧光标记增强绿色荧光蛋白EGFP

大多荧光染料易于淬灭，缺乏具有灵敏性高、稳定性好的标记基团，伴随荧光蛋白技术、光学技术，特别是实时显微镜技术的革命性发展,绿色荧光蛋白(GFP)，特别是增强―型绿色荧光蛋白( EGFP)作为一类新型的荧光探针。

构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系方法：PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagentip500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞.G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性.结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光.加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela—EGFP.激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela—EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,发射峰为509nm.Hela—EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力.

荧光标记增强绿色荧光蛋白质粒pEGFP/荧光标记增

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