【求助】HAT,HT,PEG???

作者：张馨予

说明你对杂交瘤细胞筛选的原理还没有弄清楚。

细胞内DNA的合成有内源性和外源性两个途径，DNA的内源性生物合成途径是指细胞可利用谷氨酞胺与尿嘌呤核昔单磷酸合成DNA，这是主要途径。这一合成途径可以被叶酸的拮抗物一氨基喋吟(A)所阻断。DNA的外源性生物合成途径包括:细胞通过鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)利用次黄嘌呤(H)合成嘌呤核昔酸，通过胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase, TK)利用胸腺嘧啶核昔(T)合成嘧啶核昔酸，进而合成DNA。HAT选择性培养基是在常规培养基内添加了氨基喋吟(A)，用以阻断DNA的内源性生物合成途径，同时提供核普酸合成的前体次黄嘌呤(H)和胸腺嘌呤核昔(T),供细胞利用外源途径合成DNA。

用于细胞融合的骨髓瘤细胞是经过8一氮鸟嘌呤处理缺失HGPRT的营养缺陷型细胞，或缺失TK的缺陷型细胞，该细胞只有核昔酸合成的内源性途径，而没有外源性合成途径，所以在HAT培养基中骨髓瘤细胞和它们彼此融合的细胞均被杀死，未融合的淋巴细胞和它们彼此融合的细胞不能传代而最终死亡，而杂交瘤细胞获得了骨髓瘤细胞的遗传信息，能在体外无限生长，又从鼠脾淋巴细胞中获得了HGPRT或TK，在该培养基中可利用生物合成的外源性途径合成DNA。因此，只有杂交瘤细胞能够在HAT培养基中大量生长繁殖。

之后用HT主要是起一个缓冲的作用。因为杂交瘤细胞的主要途径被氨基喋呤阻断，如果一下子恢复到正常的合成途径，势必会影响杂交瘤细胞的正常生长。所以用HT培养基过渡一下，这时两条合成途径都起作用，起到类似缓冲的作用。

PEG就是聚乙二醇，其促融的原理目前还不是完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排，从而促进细胞融合。