美国科幻大片里的生物实验室现实里是怎么样的

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

　　在过去的十年中，RNA-Seq技术迅速发展，因为能够从整体水平研究基因功能以及基因结构，揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理，所以广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。由于RNA本身不稳定，而mRNA只占抽提总RNA的3%-4%，且RNA-seq最常用的磁珠富集法对于RNA的完整度要求也很高，所以，提取作为科研实验开始的第一步是十分重要的一个环节。

　　今天小欧就来为大家带来提取界的葵花宝典，一起来了解RNA提取液氮研磨组织时的注意事项吧~

　　一、液氮研磨重要性

　　1、由于RNA的分子结构特点，RNA极易降解，液氮可以使样本组织瞬间达到低温状态，抑制组织内源性RNase降解RNA；

　　2、由于液氮极低的温度可以使样本组织和细胞都变得很脆（对，就是嘎嘣脆的那种~），通过研磨便于细胞的破碎，释放出细胞内部的核酸；

　　3、组织的匀浆过程是RNA提取是否成功的关键步骤之一，液氮研磨可以保持组织在匀浆过程中持续处于低温状态，防止研磨过程中RNA的降解；

　　二、液氮研磨的原理(研钵)

　　液氮的温度为一196℃,它既能使各种组织成分不易被破坏或降解（终止细胞内外一切生物反应，又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎）。

　　三、液氮研磨流程

　　1. 灭菌

　　研钵的灭菌180度烘2h，每份样本使用单独的研钵、镊子、剪刀等取样工具，防止交叉污染，且取样工具需要远离垃圾桶，防止污染样本。

　　2. 预冷

　　1) 用记号笔在收集管盖上和管壁上，都写上样品名称；

　　2) 将样品、收集管、勺子放在液氮中预冷；

　　3) 将液氮小心加入并浸满研钵，浸泡预冷研杵与研钵（加入液氮时，缓慢加入，防止液氮飞溅），一般加两次液氮就很好的预冷了。

　　3.放入组织将组织迅速转移至液氮内，确保组织全部浸没在液氮中。

　　4.破碎

　　使用研杵在液氮中轻轻敲打组织，将组织打碎成小块，要注意切勿用力过度，要防止组织块飞溅出研钵；在液氮即将挥发完时，使用研杵对组织样本进行碾压研磨。注意研磨过程要朝着一个方向研磨。

　　5.中途补充液氮

　　待液氮挥发完后，立即加入1/3研钵体积的液氮(注意，加入液氮速度要缓慢，切勿使得液氮冲击力过大，将组织样本冲出研钵）。

　　6. 充分研磨2-3次

　　迅速用研杵研磨组织，根据组织状态的变化程度，在确保组织始终处于冰冻状态下，及时补充液氮进行研磨，直至组织被研磨成粉末状。

　　7.收集聚拢样品

　　最后再补充一次液氮聚拢粉末，用勺子搅拌粉末，待液氮挥发完全粉末泛白。

　　8.装取样品