细胞培养过程中环境污染是如何发生的？实验室

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

细胞培养过程中环境污染是如何发生的？实验室如何消毒灭菌？

2022-02-17 17:20 来源: 农业微生物控制

原标题：细胞培养过程中环境污染是如何发生的？实验室如何消毒灭菌？

细胞培养对无菌环境的要求较为严格。微生物污染通常是造成细胞培养失败的主要原因，细胞间的杀菌主要涉及空气的杀菌，其常见方法如下。

细胞培养箱常用的消毒灭菌方法

紫外线消毒:

紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。离地面 2 米的 30W 灯可照射 9 平方米房间，每天照射 2－3 小时，期间可间隔 30 分钟。灯管离地面 2 米以外要延长照射时间，2.5 米照射效果较差。紫外灯照射工作台的距离不应超过 1.5 米，照射时间 30 分钟为宜。由于上述各种情况的不确定性，导致紫外线杀菌效果不是很理想，一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用，紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此不要在紫外线灯照射下进行操作。

细胞培养器材如何清洗灭菌?

甲醛熏蒸

甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性，使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”，用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质，并且细胞培养实验室一般空气流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要紧急使用的话，在甲醛灭菌完后，可以用等量的氨水中和空气中的甲醛。

空气过滤

过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。在体外培养时，过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。目前，大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。

细胞培养过程中环境污染是如何发生的？

1，取放细胞时引起的污染

细胞培养过程中，取放细胞是最基本的操作，培养房开关门的瞬间，环境中的微生物或多或少会进入培养箱中，而且内外温差导致内门冷凝水的产生，极易吸附微生物，都是造成培养箱污染的风险因素。

2，灭菌不彻底造成的二次污染

细胞培养过程中，因其它操作问题（如培养基泼洒，水盘污染等），造成培养房的大规模污染也时常会发生，此时就需要对培养箱进行灭菌消毒，常规的消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒的效果，特别是对真菌等顽固性污染，无法进行彻底灭菌，导致后续培养过程中细胞污染频发。

培养细胞的实验室怎么彻底消毒

如何有效避免污染？

1.重视细胞房管理工作，规范操作

定期进行细胞房清洁消毒工作，规范实验人员操作（如身着白大褂、换鞋等），创造洁净培养环境。

2.避免频繁查看细胞

做好实验规划，减少培养箱门开关的频率，取放细胞时需佩戴洁净的手套，并用少量的 70% 医用酒精（过多会导致培养箱中残留乙醇蒸汽）擦拭培养瓶/皿表面，从而降低细胞培养箱污染的风险；

3.定期维护和灭菌，预防污染

定期清洁维护，培养箱内用水灭菌后使用并定期更换，选择培养箱时，可优先考虑有自动灭菌功能的培养箱。细胞房一旦发生污染，及时进行消毒灭菌工作。

专家建议德国奥克泰士消毒剂，主要成分过氧化氢银离子。食品级无色无味无毒无残留型，是目前国际上最为先进的一款实验仪器设备环境消毒灭菌剂，由于其独特的作用原理，能够杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。IFS国际食品标准认证，欧盟EMAS检测认证，ISO9001、ISO14001环境管理体系认证等。是一款高效广谱的食品级杀菌消毒剂。具有杀菌彻底，不产生微生物耐药性，无任何毒性残留，不造成重采用的氧化剂为过氧化氢，它与稳定剂结合形成复合溶液。作为催化剂添加的银离子可以保持长久的效用。银离子的杀菌作用是基于单价银离子通过共价键和配位键来与细菌蛋白质牢固结合，从而使细菌钝化或沉淀。能在实验室仪器设备，细胞室消毒中迅速杀灭各种微生物（包括芽孢）或者抑制微生物繁殖的高效广谱的食品级进口高效杀菌剂。现已十分广泛的应用于各种实验室仪器设备细胞室环境消毒中