核酸提取有那么难?从小白到大神,只差这一步
核酸提取作为分子实验中最基础的实验之一,几乎是所有实验的基本,无论后续的克隆、PCR、qPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利进行。今天,大师兄给大家总结了一波核酸提取的干货,速速跟上学习队伍吧
分离纯化核酸总原则
1、 应保证核酸一级结构的完整性
2、排除其它分子的污染
为了保证核酸结构与功能的研究,完整的一级结构是最基本的要求,因为遗传信息全部贮存在一级结构之中,核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。
核酸纯化的三点要求
1、核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子
2、其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度
3、排除其它核酸分子的污染,如提取DNA分子时应去除RNA,反之亦然
核酸分离注意事项
1、尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏
2、减少化学因素对核酸的降解,为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏,操作多在 pH4 - 10 的条件下进行
3、减少物理因素对核酸的降解,物理降解因素主要是机械剪切力,其次是高温
4、防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键,直接破坏核酸的一级结构
总结
核酸提取的方案,应根据具体生物材料和待提取的核酸分子的特点而定,对于某特定细胞器中富集的核酸分子,事先提取该细胞器,然后提取目的核酸分子的方案,可获得完整性和纯度两方面质量均高的核酸分子。
其实,不管是初入实验室的实验新手,还是经验丰富的师兄师姐,只要在核酸基因实验方面遇到了问题,都可以抛到丁香实验平台上。
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(图片来源于丁香实验)
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