【聚合酶链式反应实验报告】聚合酶链式反应实

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

篇一：聚合酶链式反应PCR实验报告

实验二聚合酶链式反应（PCR）

一、实验原理

聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。

二、器材与试剂

1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪

2.试剂：引物，模板，Taq DNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O, 2*PCRmix溶液，DNA染料

三、实验步骤

PCR反应体系的建立

取离心管，依次加入试剂混匀

1．H2O 12μl

2．模板 1μl

3．引物T7 1μl

4．引物 sp6 1μl

5．2*PCRmix 15μl

PCR仪的热循环反应

把离心管放入PCR仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

2. 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

3. 引物的延伸：经加热至72℃左右DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复该循环30次，每次需要2-3分钟。

电泳检测结果

扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。

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篇二：聚合酶链式反应和琼脂糖凝胶电泳实验报告

实验三聚合酶链式反应（PCR）以及琼脂糖凝胶电泳实验目的

1.掌握PCR反应的原理及各反应成分的作用；

2.熟悉PCR反应程序的设计规则；

3.掌握引物的设计原则及其与PCR其他成分的配制方法；

4.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及其应用范围；

5.熟悉琼脂糖凝胶电泳相关缓冲液的配制方法。

实验原理

一．聚合酶链式反应原理

在已知待扩增模板全部或部分序列的情况下，依据DNA半保留复制的机理，在含有Mg2+的缓冲溶液中，采用耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在特异性引物（分为上游和下游引物）的引导下，通过dNTP为原料，以cDNA或DNA等为模板，在人为控制DNA合成系统（PCR仪）温度调节下，通过变性（95℃）、退火（50-60℃ ）及延伸（ 72℃ ）等3个步骤的循环进行（30-35循环），在体外进行双链DNA变性为单链，单链DNA与特异性引物退火形成局部双链，进而在DNA聚合酶的作用下使引物沿相应模板延伸为特异性引物所限定范围的大量双链DNA的体外合成反应。

本质为体外DNA合成的酶反应。

二．琼脂糖凝胶电泳反应原理

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。在一定电场强度下偏碱性的缓冲液中（TAE pH8.0或TBE pH7.5-7.8），DNA分子带负电，其迁移速度取决于分子筛效应，在电荷效应与分子筛效应作用下，具有不同的相对分子量及构型的DNA片段泳动速度不同。DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。

凝胶电泳不仅可分离不同分子量的DNA，也可以分离分子量相同，但构型不同的DNA分子。如质粒的三种构型的泳动速率不同：超螺旋闭合环状质粒最快，线型质粒其次，开环质粒最慢。

实验步骤

（一）PCR 加样术式

在一微量离心管中依次加入下列试剂：

水煮裂解后的细菌液 4?L

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篇三：聚合酶链式反应技术及其应用

华中农业大学

毕业论文（设计）

聚合酶链式反应技术及其应用

学生姓名：梅慧玲

指导老师：李绪友

所在系部：林业与生态学院专业：生物工程

二零一三年四月

摘要………………………………………………………………………1 关键词……………………………………………………………………1

1PCR概述…………………………………………………………..…..1

1.1PCR定义…………………………………………………..……...1

1.2PCR类型…………………………………………………..……...2

1.3PCR技术的基本原理……………………………….………..…..3 2PCR技术的特点……………………………………………….………4

2.1特异性强………………………………………..………………..4

2.2灵敏度高…………………………………….…………,………..5

2.3简便、快速………………………………………………………5

2.4对标本的纯度要求低…………………………………..………..5

3PCR技术的应用………………………………………………...….....6

3.1PCR在目的基因制备中的应用…………………………….…..6

3.2PCR临床医学中的应用…………………………………....…...6

3.2.1遗传病的基因分析……………………………………,…...7

3.2.2肿瘤的诊断及转移确定……………………………………7

3.3PCR在古生物学中的应用……………………………………...8

3.4PCR在生态学研究中的应用……………………………….…..8

4结语...............................................................................................8

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篇四：PCR实验报告

普通生物学实验报告

实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉

一、特异性目的片段DNA的扩增

（一）实验原理