小儿广朴止泻口服液治疗腹泻机制的预测及初步

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

小儿广朴止泻口服液治疗腹泻机制的预测及初步验证

2022-05-01 08:46 来源: 武哥说生活

原标题：小儿广朴止泻口服液治疗腹泻机制的预测及初步验证

小儿腹泻是一种由多病原及多因素引起的儿科消化道多发病和常见病[1]，是全球范围内引起5 岁内儿童死亡的第2 大原因[2]。目前临床多采用抗生素对症治疗急性腹泻，对于慢性腹泻尚无特效药物，而长期服用抗生素易引起耐药性、便秘、恶心、肠道菌群紊乱等不良反应[3-4]。中医无“腹泻”之病名，可将其归属于“泄泻”范畴[5]，中医认为引起小儿腹泻的常见病因包括感受外邪、内伤乳食、脾胃虚弱或脾肾阳虚，病位在脾胃[6]，脾胃运化失常，清浊相干，并走大肠。临床主要从“健脾运脾”和“淡渗利湿”2 个方面入手治疗小儿泄泻，并取得了较好的疗效。小儿广朴止泻口服液源于我国著名中医儿科专家倪珠英教授的临床经验方，主要由广藿香、苍术、茯苓、泽泻、厚朴、车前草、陈皮以及六神曲8 味中药组成。小儿广朴止泻口服液临床用于治疗小儿感染性腹泻和非感染性腹泻的疗效良好，然而其作用机制却不明确。因此本研究借助于数据库和分子对接技术预测小儿广朴止泻口服液治疗腹泻的有效成分及可能的作用靶点，并在大鼠小肠上皮IEC-6 细胞上进行了初步的验证，以期为后续研究提供参考。

1材料

1.1 细胞

IEC-6 细胞购自北京协和细胞库。

1.2 药品与试剂

1.3 仪器

Universal hood II型凝胶成像系统（美国Bio-Rad 公司）；Nanodrop 分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific 公司）；Synergy2 多功能酶标仪（美国Bio Tek 公司）。

2 方法

2.1 活性成分和药物靶点的收集

通过中药系统药理学平台（TCMSP ）和文献报道搜索小儿广朴止泻口服液（广藿香、苍术、茯苓、泽泻、厚朴、车前草、陈皮、六神曲）的活性成分，根据药物药动学参数进行筛选，纳入口服生物利用度≥30% 且类药性≥0.18 的活性成分[7]，同时将《中国药典》2020 年版收载的指标性成分重新纳入。记录活性成分PubChem ID 、靶点名称，通过Sting 平台转换靶点蛋白名称为基因名称，通过PubChem 数据库搜索文献报道的靶点，合并所有的药物靶点用于后续研究。

2.2 腹泻疾病靶点预测

通过人类基因数据库（GeneCards ）和DisGeNET 数据库检索腹泻疾病基因。在Genecards 数据库中选择关联分数＞20 的基因[8]，在DisGeNET 数据库中选择证据指数（evidence index ，EI ）＝1 、疾病特异性指数（dysphoniaseverity index ，DSI ）＜0.5 、疾病多效性指数（disease pleiotropy index ，DPI ）＞0.5 、score ≥0.01 的基因，2 个数据库得到的基因合并去重后获得腹泻相关基因。随后与药物靶点取交集，并绘制韦恩图，提取的交集靶点即为小儿广朴止泻口服液治疗腹泻的潜在靶点。

2.3化合物- 靶点网络的构建与拓扑分析

将化合物、交集靶点导入Cytoscape 软件生成化合物- 靶点网络图，对该网络中节点的多个拓扑参数进行分析，计算每个节点的度中心性、中间中心度、紧密中心性以及拓扑系数。度中心性值大于度中心性值中位数2 倍的节点称为重要节点，其他指标大于所有节点的中位数的节点称为核心靶点[9]，筛选出小儿广朴止泻口服液发挥治疗作用的核心化合物和核心靶点。

2.4 蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interactionnetwork，PPI）网络的构建与分析