吴茱萸碱纳米结构脂质载体处方优化和SD大鼠体内

作者：杨超月

2.1 Evo-NLC的制备工艺

取处方量吴茱萸碱原料药、600 mg的双硬脂酸甘油酯和油酸置于圆底烧瓶，加入无水乙醇和丙酮的混合溶剂（1∶2）10 mL，70 ℃水浴加热搅拌溶解，得澄清透明的有机相。配制一定质量分数P188的水溶液100 mL，置于70 ℃水浴中，转速为850 r/min磁力搅拌溶解后得水相。取有机相滴加至水相，滴毕后持续搅拌2 h。高压均质后立即置于−10 ℃冰箱固化10 min，经0.45 μm微孔滤膜滤过，用蒸馏水定容至100 mL，得Evo-NLC混悬液。

2.2 HPLC法测定吴茱萸碱含量

2.2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（65∶35）；检测波长为225 nm；体积流量为1.0 mL/min；柱温为35 ℃。进样HPLC后，吴茱萸碱出峰位置在7.2 min左右（图1），专属性较高，理论塔板数以吴茱萸碱计不低于12 000。

2.2.2 线性关系考察称取吴茱萸碱对照品20 mg至50 mL量瓶中，加入甲醇40 mL超声1 min（功率为200 W、频率为37 kHz），放置至室温，滴加甲醇定容至刻度得400 μg/mL的吴茱萸碱对照品储备液。采用甲醇-0.1%甲酸水溶液（65∶35）作为稀释液，配制10.00、5.00、2.50、1.00、0.10、0.05 μg/mL系列质量浓度对照品溶液，进样分析。以吴茱萸碱的峰面积（A）对质量浓度（C）作线性回归，得回归方程A＝19.854 3 C＋0.987 2，r＝0.999 8，可见，吴茱萸碱在0.05～10.00 μg/mL线性关系良好。

2.2.3 供试品溶液制备取Evo-NLC混悬液1 mL至100 mL量瓶中，加入50 mL甲醇超声1 min，采用流动相定容至刻度，过0.45 μm微孔滤膜，即得Evo-NLC供试品溶液。

2.2.4 精密度考察取Evo-NLC供试品溶液，连续进样6次，记录吴茱萸碱色谱峰的峰面积，计算得吴茱萸碱峰面积的RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性考察取Evo-NLC供试品溶液于制备后0、4、8、12、16、24 h进样，记录吴茱萸碱色谱峰的峰面积，计算得吴茱萸碱峰面积的RSD为0.82%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.6 重复性考察按“2.2.3”方法处理6份Evo-NLC供试品溶液，进样，记录吴茱萸碱色谱峰的峰面积，计算得吴茱萸碱质量浓度的RSD为1.65%，表明重复性良好。

2.2.7 加样回收率考察取9份Evo-NLC混悬液，体积均为1.0 mL，分别置于100 mL量瓶中，分为低、中、高质量浓度3组，每组3份。分别加入吴茱萸碱对照品储备液（质量浓度为400 μg/mL）0.9、1.2、1.5 mL，各样品加入50 mL甲醇超声1 min，加入流动相定容，过0.45 μm微孔滤膜，进样测定，计算得吴茱萸碱的平均加样回收率分别为99.71%、100.21%、99.83%，RSD分别为0.94%、0.62%、0.71%，表明回收率较高。

2.3 包封率、载药量、粒径及Zeta电位的测定

取Evo-NLC混悬液1 mL至100 mL量瓶中，加入50 mL甲醇超声1 min，加入流动相定容，过0.45 μm微孔滤膜，进样测定吴茱萸碱总量（m总）。取Evo-NLC混悬液1 mL，不加冻干保护剂直接冻干，称定质量（m）。另取Evo-NLC混悬液1 mL，至超滤管中（截留相对分子质量8000～14 000）， 10 000 r/min离心45 min，取续滤液进HPLC测定吴茱萸碱游离药量（m游离）。按照文献方法[9]分别计算包封率和载药量。

包封率＝(m总－m游离)/m总

载药量＝(m总－m游离)/m

取Evo-NLC混悬液0.5 mL，蒸馏水稀释40倍后置于粒度分析仪分别测定粒径、多分散指数（polydispersity index，PDI）及Zeta电位。

2.4 Evo-NLC单因素考察

2.4.1 吴茱萸碱用量的考察取双硬脂酸甘油酯和油酸600 mg，固-液脂质比为4∶1，P188用量为1.0%，均质压力为80 MPa，次数为5次，均质温度为45 ℃的条件下，考察吴茱萸碱用量对包封率、载药量、粒径等指标的影响，结果见表1。随着吴茱萸碱用量的增加，包封率总体呈现减小趋势，这是由于在固-液脂质用量不变的情况下，其包载药物的能力有限。载药量呈现先增加后减小趋势，而粒径及PDI值均呈增加趋势，但Zeta电位绝对值均大于30 mV。可见吴茱萸碱用量对Evo-NLC的指标影响较大，当吴茱萸碱用量为60 mg时包封率和载药量相对较高，粒径、PDI和Zeta电位绝对值大小也相对理想。

2.4.2 固-液脂质比的考察固定吴茱萸碱用量为60 mg，取双硬脂酸甘油酯600 mg和处方量的油酸置于圆底烧瓶，P188用量为1.0%，均质压力为80 MPa，次数为5次，均质温度为45 ℃的条件下，考察不同固-液脂质比对Evo-NLC的包封率、载药量、粒径等指标的影响，结果见表2。当未加入液态脂质时包封率和Zeta电位绝对值较低，粒径及PDI值较大。当固-液脂质比分别为2∶1、4∶1、6∶1时，包封率、载药量和Zeta电位绝对值先上升后下降，而粒径和PDI值先下降后再上升。可见，固液脂质比对Evo-NLC的影响较大，当固-液脂质比为4∶1时各指标相对较佳。