常见的PCR反应抑制物

作者：张馨予

常见的PCR反应抑制物-体系内部因素

IVD技术工程师在浙江

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引物：引物是整个PCR反应中非常重要的一个组分，也是决定PCR产物特异性的关键，引物设计时需要考虑产物的特异性与扩增效率

扩增酶和浓度：不同的扩增酶的识别序列的能力，扩增的效率都有不同，在设计PCR时可以采用设计几种梯度来确定最佳的扩增效能

dNTP的质量与浓度：dNTP溶液时酸性的，一般反应体系合适的PH在7.0-7.5，因此需要调整其PH值.此外四种dNTP的浓度应该相等，如果其中一种浓度过高就会引起错配，浓度过高又会影响PCR的产物产量

模板:用于扩增的起始DNA浓度与质量也是PCR成功的重要因素，在PCR之前，建议可以使用紫外分光光度计或是荧光计进行浓度与质量的测定，另外RNA的样本抽提时更要小心，不要混入基因组，并注意保存以免降解

Mg2+浓度：会影响PCR反应的特异性与产量，Mg2+的浓度过高，反应特异性会降低，容易出现非特异性的扩增，浓度过低会降低扩增酶的活性，降低反应产物

PCR步骤中的反应时间：退火的时间需要根据引物序列与扩增效率，设置梯度确认最佳的时间，延申需要根据扩增产物长度，一般来说1kb以内的30-40″之间

循环次数：循环次数决定了PCR的扩增产物，循环次数越多，产物浓度就越大，但是非特异性也会增加。一般的设置在30-45之间，具体还是需要结合模板DNA的浓度与质量来设置。