双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，

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楼主小白一枚，在做双荧光素酶报告实验。

一： 肺癌细胞292，铺的24孔板，铺板前没计数，隔天镜检，细胞密度有点低，应该不到90%左右，可以再等一天转染不？


二：实验载体与海肾荧光素载体的比例多少合适呢？另外miRNA类似物加多少量？   


三：DNA的总量是加上miRNA类似物的嘛？


四：DNA总量与lipo2000的比例？


五：铺板用的培养基是含有抗生素的，转染前PBS清洗，这个影响大不大？ 转染前需要不需要细胞饥饿处理？


六：24孔板无血清无抗培养基500 uL ＋ 稀释质粒与稀释lipo2000的体积，终体积有多少？


问题比较多，请诸位做过的大神予以指点。


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