一文解决80%的双元载体问题
在之前的文章“说说那些隐秘往事…”中，我们详细介绍了农杆菌及常用的载体系统，今天伯小远想再和大家一起来学习一下双元载体，主要想讲讲目前最常用的双元载体、载体各元件对转化的影响，最后再分享一个基因功能研究载体工具包，文末还有一个彩蛋噢。
双元载体图谱
一个典型的双元载体图谱如下（图1）。载体上的主要元件包括边界序列（左边界LB和右边界RB），目的基因（在构建重组载体之前此处是多克隆位点（MCS）的位置），报告基因或蛋白标签（依实验目的选择），真核筛选基因（常见的是潮霉素磷酸转移酶基因HptII、草丁膦乙酰转移酶基因Bar、新霉素磷酸转移酶基因NPTII等），启动子（组成型启动子常驱动筛选基因或目的基因，包括CaMV 35S、Ubiquitin等，有时依实验目的还会选择目的基因自身的启动子、特异性组织表达启动子或诱导启动子），终止子，质粒复制起始点（在大肠杆菌或农杆菌中可使质粒起始复制），原核筛选基因（常见氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、庆大霉素等）。双元载体可在转化农杆菌后，直接用于遗传转化实验。
常用的双元载体
大家可能会好奇其他的课题组会使用哪种双元载体多一些？对于这个问题，伯小远采用了两种方法进行统计：一种是统计在我司做遗传转化服务的老师提交的载体名称，另一种是统计SCI英文论文中使用的载体名称。
先来看看第一种方法，伯小远收集了我司37079个遗传转化结题项目的载体名称，剔除敲除、干扰项目等载体名后，将名称进行词频统计，结果显示，使用pCAMBIA系列载体的项目占总项目的18255/23681=77.1%。
注：pBWA载体为我司以pCAMBIA载体为骨架进行设计并改造的。pCAMBIA载体无知识产权归属问题，Cambia机构已开放给任何人使用的权利。
图2 载体名称词频图。数据来源：伯远生物37079个遗传转化结题项目的载体名称（PS：各位金主，数据仅做本次统计使用，绝无他用，切勿担心）。
关于第二种方法，伯小远是想统计英文论文中各种双元载体出现的频率，原本伯小远是想用关键词与Ftracker数据库中的信息进行比对，然而数据库虽然包含了1350万+篇文章，但是只有题目和摘要的信息，并没有全文的信息，想了半天，那就只能使用Google学术搜索出的关键词条数来进行频率计算了，所以这个结果只能参考一下喔，实际并不能反映真正论文中各种双元载体出现的频率。结果显示，pGreen载体出现的概率为33%，pCAMBIA出现的概率为15%。如果大家有更好的方法来进行统计，还望分享给伯小远喔！
图3 载体名称词频图。方法：将pCAMBIA、pCAMBIA1300、pCAMBIA1301、pCAMBIA2300、pCAMBIA1305、pCAMBIA1390、pUN1301、pCXUN、pBI121、pPZP、pGreen在Google学术中进行搜索，将词条数进行了词频统计。注：本方法仅做参考。
[ 载体档案 ]
有些小伙伴在做遗传转化之前，可能会纠结到底使用哪种双元载体，根据不同的实验目的我们需要选择的载体并不相同，不同的载体系统各有特点，在使用之前一定要判断一下是否适用、是否需要改良，现在，我们就来系统的了解一下常见的双元载体吧。
pBIN载体档案
名称：pBIN
文献：(Bevan, 1984)
原核抗性：Kan
真核抗性：Kan
特点：可进行蓝白斑筛选
代表性载体图谱：
pBI载体档案
名称：pBI
文献：(Jefferson, 1987)
原核抗性：Kan
真核抗性：Kan
特点：无启动子的载体，装有GUS基因，可进行启动子研究
代表性载体图谱：
pPZP载体档案
名称：pPZP
文献：(Hajdukiewicz et al., 1994)
原核抗性：Spec/Chl
真核抗性：Kan/Gent
特点：质粒小、稳定、可进行蓝白斑筛选
代表性载体图谱：
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