基于特征图谱、化学计量学和分子对接的复方阿

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

基于特征图谱、化学计量学和分子对接的复方阿胶浆质量标志物研究

2021-12-01 08:12 来源: 武哥说生活

原标题：基于特征图谱、化学计量学和分子对接的复方阿胶浆质量标志物研究

摘要：目的以质量标志物（quality markers ，Q-Marker ）“五原则”为指导，结合特征图谱、化学计量学、分子对接和含量测定等技术，开展复方阿胶浆（Fufang E’jiao Jiang ，FEJ ）治疗贫血症的Q-Marker 研究。方法色谱柱Agilent Zorbax SB AQ-C 18（250 mm ×4.6 mm ，5 µm ），流动相为0.1% 甲酸乙腈溶液-0.1% 甲酸水溶液，体积流量1.0 mL/min ，柱温30 ℃，检测波长330 nm ，焦地黄苯乙醇苷A 1为参照峰，建立FEJ 特征图谱。采用层次聚类分析（hierarchicalclustering analysis ，HCA ）、主成分分析（principal componentanalysis ，PCA ）、偏最小二乘法- 判别分析（partial least squaremethod-discriminant analysis ，PLS-DA ）对不同批次FEJ 进行分析。查阅《中国药典》和文献，结合组方配伍环境（君、臣、佐使）、成分传递与溯源等多因素，收集筛选质量控制6 个关键成分。在GEO 数据库中检索筛选贫血症（anemia ）的差异基因，采用Discovery Studio 2016v16.1 软件，将成分与贫血症相关靶点进行对接验证。以330 、270 nm 双波长同时测定FEJ 中异毛蕊花糖苷和党参炔苷的含量。结果FEJ 特征图谱中指认了咖啡酸、绿原酸、洋地黄叶苷C 、阿魏酸、焦地黄苯乙醇苷A 1、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B 1、异毛蕊花糖苷共8 个特征成分。HCA 、PCA 和PLS-DA 将16 批FEJ 分为3 类，其中异毛蕊花糖苷、洋地黄叶苷C 和焦地黄苯乙醇苷A 1对FEJ 质量影响最为显著。8 个特征成分和6 个关键成分的分子对接结果表明，异毛蕊花糖苷、党参炔苷、绿原酸、毛蕊花糖苷4 个成分能够与激肽原-1 （kininogen-1 ，KNG1 ）、泛素样蛋白ISG15 （ubiquitin-likeprotein ISG15 ，ISG15 ）、赖氨酸特异性脱甲基酶6A （lysine-specificdemethylase 6A ，KDM6A ）、乙酰化酶动力蛋白-3 （dynamin-3 ，DNM3 ）、蛋白酶激活受体2 （proteinase-activatedreceptor 2 ，F2RL1 ）、半胱氨酰白三烯受体1 （cysteinyl leukotrienereceptor 1 ，CYSLTR1 ）6 个靶蛋白通过氢键、疏水键、π-π 键等作用力结合，具有较好的活性，可作为FEJ 的Q-Marker 。16 批样品中异毛蕊花糖苷、党参炔苷质量浓度分别为6.05 ～12.30 、9.14 ～16.30 μg/mL 。结论建立了FEJ 特征图谱，结合化学计量学和分子对接等技术，筛选了4 个Q-Marker 异毛蕊花糖苷、党参炔苷、毛蕊花糖苷、绿原酸，并建立了异毛蕊花糖苷、党参炔苷的含量测定方法，为FEJ 质量控制提供参考。

复方阿胶浆（FufangE’jiao Jiang ，FEJ ）包括阿胶、红参、熟地黄、党参、山楂共5 味中药。原方出自明代《景岳全书》中“两仪膏”，按照“气血互生，气升血长”的中医理论加味而成。临床常用于气血两虚、头晕目眩、心悸失眠、食欲不振及白细胞减少症和贫血等症[1]。《中国药典》2020 年版FEJ 质量标准重点关注了阿胶的真伪和优劣。在中医理论中，气血相关理论与治疗血管生成相关。现代药理研究表明，血管新生是涉及多种细胞如内皮细胞和血管平滑肌细胞的多步骤复杂生物过程，是相关细胞因子、细胞外基质等与细胞之间相互作用的结果。在缺血刺激下，新的血管和侧支循环会逐渐生成，达到改善缺血的目的[2-3]。文献报道，斑马鱼模型可用于研究血管生成[4-5]、微血管功能[6]等方面。本课题组前期研究发现FEJ 的促血管生成活性优于单味药阿胶。因此红参等4 味植物来源中药对FEJ 功效有很重要的贡献，质量标准应该对其予以关注。