免疫组化（IHC）│常见问题及解析集锦
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免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。
实验过程包括切片制作（固定，脱水，透明，包埋，切片，贴片，烤片），脱蜡，水化，阻断，抗原修复，封闭，一抗孵育，二抗孵育，显色，复染，封片，分析。
实验过程常见问题如检测结果阴性，非特异性染色，染色强度不够，着色不均，脱片，干片等。一起来看案例解析，助您高效做出准确实验结果。
1 标本的固定
常见问题：
组织固定不及时或不完全固定,HE染色细胞核发灰模糊，对比不鲜明；免疫组化染色结果不理想，通常组织离体2h后抗原完全丢失。
01
范例1
检测组织：人淋巴结组织石蜡切片
检测：CD45染色
问题：组织固定不充分，淋巴结边缘淋巴细胞CD45染色强阳性，组织内部淋巴细胞CD45染色弱阳性，染色不均。
02
范例2
检测组织：肾脏组织石蜡切片
检测：HE染色
问题：固定不及时或固定不完全，细胞核模糊，对比不鲜明。
建议：
1、组织离体后尽快固定， 组织块大小为15×15×5mm，切开固定效果好；
2、固定液以10％中性福尔马林缓冲液为佳；
3、固定时间在4h-24h之间，长时间固定会影响抗原决定簇的暴露，产生阴性结果；
4、固定液的量要超过组织体积5倍以上。
2 标本的取材，脱水，浸蜡
常见问题：
如果组织脱水、浸蜡不充分，蜡块会出现组织收缩凹陷，而且在免疫组化热抗原修复操作时会容易脱片。
建议：
1 梯度酒精脱水尽量彻底充分；
2 二甲苯透明时间不宜长，1～3h为佳，透明过度会导致组织发硬发脆；
3 浸蜡应选择低熔点的石蜡，浸蜡应充分。
3 标本的切片，捞片，烤片
常见问题：
切片太厚，有刀痕，有褶皱，脱片。
01
范例1
问题：
有刀痕，影响结果的判读。
02
范例2
左：乳腺癌组织石蜡切片，Mammaglobin染色阳性，脱片，烤片时间不足。
右，乳腺癌组织石蜡切片，MUC6染色阴性，烤片时间充分。
建议：
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