新冠核酸检测室内质控怎么做？

作者：张馨予

指导老师 | 刁杨丽

单位 | 隆昌市人民医院医学检验科

前言

依据新冠诊疗第九版，新型冠状病毒核酸检测阳性为确诊新冠感染的首要标准，从事新冠病毒核酸检测的实验室应严格做好室内质控，以确保新冠核酸检测结果准确可靠，那么新冠核酸检测的室内质控应当怎么做呢？

背景

医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（以下简称“手册”）中“五、实验室质控控制与管理”的室内质控要求：实验室应按照《国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》（国卫办医函〔2020〕53号）要求规范开展室内质控。每批检测至少有1份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的1.5-3倍）、3份阴性质控品（生理盐水）。质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程[1]。

作为核酸检测人员，在实际操作中应当怎么去实施这一要求呢？采用阴性、弱阳性质控的目的又是什么呢？

手册要求每批检测需要至少加入3份阴性质控和1份弱阳性质控，新冠核酸室内质控的目的是最大可能的检出检测中的随机误差和系统误差，因此在整个核酸提取实验的过程中，上述阴、阳性质控标本应当均匀分布在患者标本中间，以充分反应实际检测中可能存在的问题。

关于质控品的具体放置位置，应注意的是所谓均匀分布于标本中间，不应当一层不变，固定于某些孔位，应当对所有的孔位起到监测的效果，在一定的时间内，尽可能保证每个孔都进行过质控的监测，从而更好的保证每个孔的扩增有效性[2]。

与生化、免疫等室内质控不同的是，PCR核酸检测需要设置阴性质控，其目的为：1.监测实验室扩增产物残留的“污染”；2.由当次实验过程中引起的污染，如阳性质控使用未瞬离，开盖不慎气溶胶经过程污染实验；3.试剂污染。

对于3份阴性质控标本，可采用1份试剂盒自带阴性对照、1份生理盐水、1份过往阴性标本作对照，更好的监测污染的发生，避免假阳性。阴性质控若检测出阳性，说明上述实验过程某环节出现问题，应当停止实验检测，立即查找原因，避免更大污染的发生。阳性质控品可采用1份第三方弱阳性质控和1份试剂盒自带阳性对照，可以更好的监测假阴性的发生。

在定性测定中，如果使用高浓度的样本，测定操作的变化不是特别大的情况下，对定性测定结果的影响不会那么明显，弱阳性质控标本能更敏感的监测假阴性的发生。因此通常使用的弱阳性样本为检出限的1.5-3倍[3]。

对于质控结果的判断：弱阳性质控品检测为阳性，阴性质控品检测为阴性，若采用内源性内标参与提取扩增，则生理盐水内标不出，阴性标本内标正常，试剂厂家自带阴性质控品根据试剂说明判断内标情况，视为在控，则报告可以发出；反之，则为失控，不可报告，应分析失控原因，必要时重新检测。

新冠核酸检测室内质控图的设计

新冠核酸检测阳性质控标本测定结果可与生化、免疫、血常规等采用传统的Levey-Jennings（L-J）质控图记录表示，横坐标X轴表示代表检测时间或测定的批次，纵坐标Y轴表示检测结果，根据阳性质控品的均值和标准差的倍数绘制质控图。

乙肝病毒（HBV-DNA）是PCR实验室比较熟悉的项目，临床医生通过对病毒载量的定量监测来评估患者治疗的效果，为了保证实验室检测结果的可靠性，更好的了解实验室的精密度，通常会将病毒载量结果通过对数转换，参照最大允许总误差0.4log,绘制L-J质控图[2]。

而目前新冠核酸检测，实验室为定性检测结果，目前未找到对应最大允许总误差（TEa）的相关依据，PCR核酸检测中的CT值可在一定程度下反应病毒载量的多少，因此可采用已知浓度的质控品CT值的变化反映不同批次中检测结果的一致性，从而反映检测结果的可靠性，例如本科室采用的第三方浓度已知的质控品，新冠核酸检测N基因、ORF基因CT值均为35左右。将每批次检测结果保存原始数据，质控品的CT值记录于lis中，再绘制成质控图，举例如下：

图1 我科使用第三方质控品检测新冠病毒核酸ORF基因的CT值

绘制质控图如下：