乙肝RNA等领域，拉脱维亚科学家发现，HBc VLP应用

作者：张馨予

原创乙肝RNA等领域，拉脱维亚科学家发现，HBc VLP应用前景

2021-02-01 11:16 来源:小番健康

原标题：乙肝RNA等领域，拉脱维亚科学家发现，HBc VLP应用前景

根据地理区域分布不同，全球已知10种不同乙肝病毒（HBV）基因型（A-H），其中以基因型A和基因型D的分布最广。基因型A、B、C、D、F、H和I进一步划分为亚基因型，全基因组组间核苷酸差异在4%-8%之间。HBV基因型分型，不仅对人类学和流行病学很有意义，而且对临床药物研发也很有用。

乙肝RNA等领域，拉脱维亚科学家发现，HBc VLP应用前景

基因型C、D、F平均比其他基因型更具致病性，基因型A、B对干扰素治疗响应优于基因型C、D。基因型还可以预测肝脏疾病的进展。关于克隆HBV全基因组的首次报道，可追溯到20世纪70年代末至80年代初。1979年，随着HBV基因组的克隆和HBV S基因（HBs）的鉴定，HBV S疫苗设计和生产进入了一个新时代。1986年，酵母来源的乙肝表面抗原成为抗乙肝的标准重组疫苗。

由于C基因（乙肝核心抗原；在大肠杆菌）中，重组HBc衣壳或病毒样颗粒（VLPs），已被公认为重组疫苗设计的强大和有前景的支架。这个观点是基于HBc的几个结构、免疫学和技术特性，如异源表达系统生产力和HBc VLPs的免疫原性。HBc在大肠杆菌中有效表达，在酵母、植物和昆虫细胞中表达较少。2021年1月30日，拉脱维亚生物医学研究和研究中心研究人员在《Microorganisms》杂志发表了，使用重组HBc VLPs包装ss和dsRNA，在不同的乙肝病毒基因型在大肠杆菌中生产HBc蛋白。

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研究人员采用硫酸铵沉淀、凝胶过滤、离子交换层析(IEX)纯化HBV形成的病毒样颗粒(VLPs)，并在大肠杆菌中克隆表达HBV的A、B、C、D、E、F、G基因型核心蛋白（HBc）。结果表明，在HBV基因型D和G的HBc中，VLP产量最高。在HBV基因型D、F和G的HBc中，分离和重新结合的可能性被证明是维持原HBc结构的。成功地把单链（ss）和双链（ds）核糖核酸（RNA），包装到HBV基因型为D和G的HBc VLPs中。

研究人员比较了HBV基因型A、B、C、D、E、F和G在大肠杆菌细胞中的生产水平，并使用最好的生产商来获得适合包装核酸的高质量VLPs。在本研究中，两种类型的RNA被包装在由HBV基因型D和G的HBc形成的VLPs中，在技术方面，这是最有前景的HBc候选。对于包装，HBc VLPs通过将VLPs分解成二聚体而完全纯化，允许去除宿主细胞来源的杂质（主要是RNA）。

还对HBc VLPs的非精密纯化，包括使用硫酸铵沉淀和凝胶过滤和离子交换色谱相结合。虽然，在技术方面，HBc/D是仅次于HBc/G最好的HBc蛋白，但在HBc/D转化子之间的表达水平差异显著，定期选择生产HBc/D VLPs的最佳克隆总是必要的。本研究人员设计中提出，由于HBc/G VLPs在大肠杆菌细胞中显示出稳定和高产量，通过简单地实验室规模，就可以获得足够数量的VLPs (1 G细胞约10 mg)。

所以，研究人员认为，与HBc/D VLPs相比，HBc/G VLPs具有明确技术优势。HBc/G VLPs和HBc/D VLPs可以作为外源功能性RNA分子的载体。在筛选实验中，发现最弱的HBc产生者是基因型C的HBc产生者，这也证明了更高的HBc产量，保证了更高纯度的HBc VLPs作为最终产物。完成并发表本项研究人员包括Ivars Petrovskis, Ilva Lieknina, Andris Dislers, Juris Jansons、Janis Bogans, Inara Akopjana, Jelena Zakova和Irina Sominskaya 。

简单的讲，他们在《Microorganisms》杂志上，介绍了一些新技术发现，而这些发现将进一步促进HBc VLPs在乙肝预防性疫苗、治疗性疫苗、基因工具疗法方面的应用。本研究人员介绍，我们展示了成功地分离/重新组合形成的一种HBV基因型D、G和F技术优势，建议一些技术成熟的国家，适合或有效获取这项技术，如使用在未来的RNA药物开发工作当中。返回搜狐，查看更多