【讨论】包含体与目的蛋白的关系

作者：张馨予

如果重组菌有包含体产生，那是不是就说明产生的包含体就是重组蛋白呢？如不是那包含体是什么？为什么回产生（非重组菌没有包含体）？确定包含体是不是重组蛋白，很简单啊，裂解细菌，取沉淀跑电泳就可以。包涵体能在光学显微镜下观察到，微小的折光颗粒，其中可能包含部分或者全部目的蛋白。

推测包涵体的形成是由于目的蛋白在表达过程中新生的多肽链没有足够的时间形成正确的折叠，如果肽链中含有强疏水区域和强带电区域容易形成包涵体。

要想提高目的蛋白形成可溶性正确折叠的比率，可以采用降低培养温度，降低诱导剂浓度，增加通气量等方法。与可溶蛋白融合表达也能增加增加目的蛋白的可溶性。另外，与 chaperone 共同表达也可能增加目的蛋白的可溶性，比如 Gro/ES 体系，DnaK-DanJ-GrpE 体系，或者折叠催化剂蛋白质二硫键异构酶（有商业化产品）。包涵体：
包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。

包涵体的组成与特性：
一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状或缺口的质粒DNA，以及脂体、脂多糖等，大小为0.5-1um，难溶与水，只溶于变性剂如尿素、盐酸胍等。

一般得到包涵体后要进行超生破菌、与可溶性蛋白分离、洗涤、变性溶解、复性，最终拿到你的相对比较纯的目的蛋白。

希望对你有帮助，祝你好运！这里的降低培养温度，降低诱导剂浓度，能说具体一点吗？