肿瘤液体活检技术：CTC和ctDNA孰优孰劣？

作者：杨超月

液态活检这一概念最早在1974年由Sorrells等提出，检测对象包括：循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)、循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)以及肿瘤外泌体（exosome），它们来源于肿瘤组织，存在于血液，可以提示肿瘤发展进程及抗药性等信息，指导个体化精准治疗。

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液体活检是什么？

肿瘤患者血液中存在少量循环肿瘤细胞以及由坏死癌细胞释放的少量循环肿瘤 DNA。通过检测血液中的循环肿瘤细胞（CTC，cycle tumor cell）和循环肿瘤DNA（ctDNA，cycle tumor DNA）对患者肿瘤进行诊断与监测的方法被称为液体活检。在临床实践中,获得肿瘤患者组织样本只有手术活检和穿刺活检两种。相比于传统的活检方法，液体活检具有副作用小、操作简单、能重复取样等有点。

液体活检的发展历程

液体活检包含了 CTC 与 ctDNA 技术。

1、CTC技术的发展历程及现状

在 1896 年，澳大利亚学者 Ashworth 在一例转移性肿瘤患者血液中首次观察到从实体肿瘤中脱离并进入血液循环的肿瘤细胞，并率先提出了 CTCs 的概念。不过长时间以来 CTCs 的检测并未在肿瘤病人的防治中发挥应有的作用，主要原因就是检测技术未取得突破性进展。从上世纪末以来 CTCs 检测技术得到了不断的改进，随之带来的是 CTCs 检测在临床的应用。

1）第一代 CTC技术：CellSearch的发展历程

第一代 CTC 技术采用的是磁珠捕获法。能够捕获 CTC 的磁珠早在 1983 被 Immunicon 公司发明。其后 Immunicon 不断完善该技术并发展出了特定 CTC 染色技术。公司在 1993-2003 年完成一系列的临床实验后，其 CTC 检测系统 Cellsearch 于 2004年获得美国FDA批准用于转移性结直肠癌、乳腺癌和前列腺癌临床检测。强生(Johnson&Johnson)下属子公司 Veridex 在 2008 年收购了 Immunicon 的 CTC 业务，并将其发展至今。CellSearch 系统是美国 FDA 批准的唯一临床用的 CTC 检测系统。该系统于 2012 年获得我国 CFDA 进口器械注册，从而成为国内唯一用于临床的 CTC 检测系统。由于其在临床使用的唯一性，Cellsearch 系统是目前 CTC 检测的金标准。

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在临床检测中，标准操作是抽取患者7.5mL血液，通过 Cellsearch 系统检测其中含有的CTC数量。临床数据表明，正常人和良性疾病患者CTC含量极少，而转移期患者根据其病情严重程度不同在血液中分布含有不同数量的 CTC。通过检测 CTC 的数量能够帮助医院判断患者的病情严重程度，并为此制订合适的治疗方案。

2）第二代：CTC检测技术前沿

为了提高 CTC 检测的灵敏度和发展对捕获CTC细胞进行后续分析的能力，在研的二代 CTC 检测采用了多种技术路线。与一代技术不同的是，二代CTC无论从技术还是市场方面均处于早期阶段。技术方面尚没有统一的标准，许多公司采用不同的技术路线实现对CTC的捕获。目前还很难判断哪一种技术路线将成为行业标准。

2、ctDNA技术的发展历程及现状

1948年首次在人体血液中发现存在ctDNA。癌症患者的ctDNA则发现于 1977年。1994年发现肿瘤患者的 ctDNA 与其体内肿瘤细胞基因突变类似。直到 2000年以后，分子生物学与基因测序技术的发展使得 ctDNA 的突变检测技术不断成熟，相关研究也越来越多。

从当前研究角度将，ctDNA 在临床应用潜力非常广泛,主要涉及到肿瘤早期筛查、肿瘤动态监测、耐药基因突变检测、评估肿瘤异质性及复发风险等作用。从已有的临床实验来看，ctDNA 的检测平台一般为二代基因测序与数字化PCR,适应症集中在非小细胞肺癌、乳腺癌、结直肠癌、皮肤癌等常见肿瘤。目前在国内市场，ctDNA已经开始应用于临床，索真基因在ctDNA检测技术的灵敏度上有较大的优势。

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临床意义

1、液体活检可以解决临床取样的难点