含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子的制备方法
本发明涉及生物医药技术领域，更具体地说，涉及一种含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子的制备方法及应用。
背景技术：
光亲和标记技术自提出到现在已取得了令人瞩目的发展，其结合现代分子生物学、细胞生物学、有机化学等多学科的优势，运用合成的光敏小分子化合物作为工具探针，经特定波长的光照射分解产生高活性的中间体，与其受体活性部位形成特异性的不可逆共价结合。它是分子水平上研究配体与受体相互作用的核心工具之一，对阐明配体与受体相互作用的机理以及药物先导物的发现有着巨大的推动作用。运用光亲和标记技术，大量的与疾病相关的靶点被发现、多种小分子与生物大分子作用的模式被确定，这些信息对合理设计药物具有非常重要的意义。
现有的靶标确证技术中通常需要在药物分子上连接较大体积的荧光基团来进行分析，这会导致探针分子活性降低、溶解度差、细胞渗透性差等缺点，而目前，采用光亲和标记技术经常被引入的光亲和基团包括苯基叠氮类、二苯甲酮类等，它们的光交联活性并不高。
因此，将光亲和标记技术应用在确证小分子靶标方面，并能够使探针分子具有较高的光交联活性，是本领域技术人员所要解决的重要技术问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子的制备方法及应用，以解决现有技术中通常探针分子较大，小分子的探针其光亲和基团的光交联活性又较低的问题。本发明提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子的制备方法，包括以下步骤：
1)药物分子参与反应得到带单羧酸的中间产物；
2)含有光亲和基团双吖丙啶的链接体与带单羧酸的中间产物在edc·hcl的缩合作用下，生成探针分子，所述链接体为2-(3-(-3-丁炔-1-基)-3h-双吖丙啶-3-基)乙-1-胺，其结构式为：
其中，步骤1)中的所述药物分子为三氮唑类化合物分子，三氮唑类化合物分子和丁二酸酐加入乙腈中搅拌，在加热条件下反应得到带单羧酸的中间产物；
或，步骤1)中的所述药物分子为bd7，bd7和丁二酸酐加入乙腈中搅拌，在加热条件下反应得到带单羧酸的中间产物；
或，步骤1)中的所述药物分子为索拉菲尼，索拉菲尼和naoh溶于无水乙醇中，在氮气为保护气的条件下，加热到70摄氏度进行反应，反应时间为8-10小时，得到带单羧酸的中间产物。
优选地，步骤2)中将带单羧酸的中间产物溶于无水四氢呋喃中，加入edc·hcl和hobt，然后逐滴加入dipea，在冰浴条件下搅拌一段时间后，加入所述链接体，室温条件下再搅拌一段时间，反应得到光亲和探针分子。
优选地，药物分子为三氮唑类化合物分子或bd7时，步骤1)还包括将药物分子参与反应后的溶液进行低压旋除乙腈溶剂，再加入水，用乙酸乙酯萃取出有机相，再经过洗涤干燥和柱层析法分离得到带单羧酸的中间产物。
优选地，药物分子为索拉菲尼时，步骤1)还包括调节索拉非尼和氢氧化钠反应后的溶液为弱酸性，加入二氯甲烷萃取出有机相，再经过洗涤干燥后去除二氯甲烷，通过柱层析法分离得到带单羧酸的中间产物。
本发明还提供一种上述方法制备的含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子在光亲和标记技术方面的应用。
优选地，含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子在确证蛋白靶标方面的应用。
本发明提供的技术方案中，含有光亲和基团双吖丙啶的探针分子的制备方法包括药物分子参与反应得到带单羧酸的中间产物，含有光亲和基团双吖丙啶的链接体与带单羧酸的中间产物发生缩合反应生成具有光亲和性的探针分子。其中链接体为含有光亲和基团双吖丙啶且端部带有炔基的链接体2-(3-(-3-丁炔-1-基)-3h-双吖丙啶-3-基)乙-1-胺，药物分子可以为三氮唑类化合物分子或者对vegfr(vascularendothelialgrowthfactorreceptor)蛋白的ⅱ亚型具有抑制作用的bd7(3-(1-(4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苄基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)苯胺)或者索拉菲尼。如此设置，由于双吖丙啶的光交联活性较好，采用双吖丙啶作为光活性基团得到的探针分子灵敏度较高，该链接体可以用于制备多种探针分子，证实了链接体广泛的实用性，将光亲和标记技术应用在确证小分子靶标方面，避免了在药物分子上连接体积较大的荧光基团导致探针分子活性低、溶解度差、细胞渗透性差的问题。
附图说明
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