蛋白样品脱盐处理方法比较
蛋白大分子脱盐要求在样品制备中经常遇到,选择合适的脱盐方法显得非常重要;在蛋白回收率、脱盐效率、蛋白生物活性、操作难易程度、耗时等方面需要综合考虑,找到合适的脱盐方式。
下面对透析法、超滤法、脱盐柱法三种常用的脱盐方式做一个对比分析,为今后选择合适的脱盐方法作为参考。
一、透析法特点:(性价比低)
1.时间长(需要过夜)
2.需要大体积的缓冲液
3.透析袋使用前处理繁琐
4.透析袋可能会破,导致样品丢失,重复使用次数少
5.样品易沉淀失活
6.价格相对低
二、超滤法特点:(性价比一般)
1.时间较长
2.重复使用次数少
3.操作简单
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.价格较高
三、脱盐柱法特点:(性价比高)
1.时间短
2.重复使用次数多
3.操作简单温和不易失活
4.蛋白回收率高
5.价格相对低
脱盐柱法案例
层析柱:1.6cm*20cm中压玻璃层析柱,装填千纯生物Pudex G25 medium填料(柱体积40ml)
样品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上样量:流速为50cm/h时,上样量为3mL(柱体积的7.5%);流速为100cm/h和150cm/h时,上样量为8mL(柱体积的20%)
不同流速下的参数值
流速(cm/h)
蛋白峰(mL)
半峰宽(mL)
盐峰(mL)
半峰宽(mL)
Rs
50
15.21
3.29
30.67
5.3
1.7998
100
19.21
7.7
33.33
8.78
0.86
150
18.56
8.42
34.09
8.82
0.9
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