二乙酸荧光素(FDA)

作者：张馨予

产品性状：白色固体粉末
产品保存：避光-20℃保存，一年有效
产品说明：
二乙酸荧光素(Fluorescein Diacetate,FDA)是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。当 FDA 进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光；而无活力的细胞因不能使 FDA 分解，而无法产生荧光。FDA 也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别是 488nm和 530nm。
使用方法：
(1)配制溶液：将 FDA 溶于丙酮中，配成浓度为5 mg./ml的溶液，置于 4℃冰箱中保存。染色时将 FDA 加入到细胞液中，使其终浓度为100μg/ml。
(2)活细胞染色：取处于对数增长期的细胞液，离心浓缩，生理盐水清洗1次，加入 FDA，在室温黑暗处放置 5 min 染色；染色后离心，生理盐水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。
(3)死亡细胞胞染色：取鲁哥氏溶液固定的死亡细胞按活细胞相同的方法进行染色。
(4)观察：用荧光显微镜观察和拍照(明场和荧光分别拍照，物镜使用 20×)。活细胞被 FDA 染成亮绿色，当细胞膜受损，荧光素无法在细胞内累积，而使细胞无法发出荧光。活性高的细胞发出强烈的绿色荧光，活性弱或死亡的细胞发光较弱或不发光。
注意事项：
(1)使用方法可依据细胞的具体情况适当调整。
(2)鲁哥氏即 Lugol’s 溶液，也就是碘液。取 6 克碘化钾溶于 20 毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入 4 克碘，等碘充分溶解，再加入 80 毫升蒸馏水，贮存在棕色
试剂瓶内。
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