荧光光谱怎么测

作者：张馨予

　　荧光光谱概述

　　荧光光谱先要知道荧光，荧光是物质吸收电磁辐射后受到激发，受激发原子或分子在去激发过程中再发射波长与激发辐射波长相同或不同的辐射。当激发光源停止辐照试样以后，再发射过程立刻停止，这种再发射的光称为荧光。荧光光谱有以下几个特点：

　　灵敏度高：荧光分析的最大特点是灵敏度高，通常情况下要比分光光度计的灵敏度高出2-3个数量级。

　　选择性强：包括激发光谱和发射光谱，在鉴定物质时，通过选择波长可以使分子荧光分析有多种选择。

　　试样量少和方法简便。

　　能提供比较多的物理参数：如激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等参数。这些参数反映了分子的各种特性，并通过它们可以得到被检测分子的更多信息。

　　荧光光谱怎么测

　　原理：

　　原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为荧光。

　　（1）激发光谱

　　是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长（或频率）变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。

　　激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定。激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。

　　（2）发射光谱

　　是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长，纵坐标为发光相对强度。

　　（3）荧光强度与荧光物质浓度的关系

　　用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀（A《0.05）时，荧光物质发射的荧光强度If与浓度有下面的关系：If=KC。

　　测试：

　　从150W氙灯光源发出的紫外和可见光经过激发单色器分光后，再经分束器照到样品表面，样品受到该激发光照射后发出的荧光经发射单色器分光，再经荧光端光电倍增管倍增后由探测器接收。另有一个光电倍增管位于监测端，用以倍增激发单色器分出的经分束后的激发光。

　　光源发出的紫外-可见光经过激发单色器分光后，照到荧光池中的被测样品上，样品受到该激发光照射后发出的荧光经发射单色器分光，由光电倍增管转换成

　　相应电信号，再经放大器放大反馈进入A/D转换单元，将模拟电信号转换成相应数字信号，并通过显示器或打印机显示和记录被测样品谱图。

　　样品制备：

　　1. 薄膜样品

　　薄膜试样可以直接在样品台上进行测试

　　2. 液体试样

　　液体试样应放入专用的液体样品槽中，固定到样品座中。

　　测试过程：

　　1. 发射光谱的测试第一步：参数设置。

　　（1）设置光谱类型。选择“Emission”发射光谱

　　（2）设置激发波长。输入激发波长

　　（3）设置发光波长范围。输入扫描的起始波长和终止波长（对于未知样，也可选择可见光全波段400~760nm）

　　（4）设置记录范围。输入纵坐标的最小和最大显示值

　　（5）设置扫描速度。

　　（6）设置狭缝宽度。可分别选择激发和发射狭缝宽度，对于发光较弱的样品，测试时可以适当增大狭缝宽度。

　　（7）参数设置完成后，点击“OK”。

　　光谱测试：

　　点击屏幕右下角“Start”按钮，开始发射光谱测试。测试完成后，保存数据。注意：这种保存只是临时保存，关机后将消失。永久保存需使用 File / Save as，选择存储路径和文件夹，点击“Save As”保存。保存后的文件，扩展名是“.SPC”，只能用测试软件程序打开。若想将测试结果转换为数据，以利于使用其他软件作图和编辑，需进行数据转换 2. 激发光谱的测试

　　基本操作同发射光谱，只是在设置光谱类型项选择“Excitation”激发光谱。

　　样品测试：

　　1．数据记录

　　测试荧光聚氨酯、荧光碳纳米颗粒、荧光染料罗丹明B或罗丹明6G溶液的荧光和激发光谱，保存好所测试样的发射和激发谱数据。

　　2．数据处理和分析