【专访JRF】安全性评估监管的趋势：体外替代方

作者：杨超月

Rajendra Nagane博士介绍：

Rajendra Nagane是微生物学博士，JRF公司毒理学助理主任兼遗传和体外毒理学系主任。他在遗传毒理学和与农业化学及制药相关的替代动物试验模型研究方面拥有15年以上的经验。目前，他的研究兴趣集中在减少动物使用的体外替代模型的开发上。Rajendra Nagane博士及其团队在JRF开发了不同的体外毒性试验模型，例如体外皮肤刺激和使用RhE皮肤模型的体外皮肤腐蚀，三个AOP驱动的皮肤体外测试致敏性模型（DPRA，角蛋白测定和h-CLAT测定）。他和他的团队在开发最新的体外遗传毒性试验（例如体外微核和小鼠淋巴瘤试验）中发挥了作用。他目前领导着一组科学家，他们正在对体外内分泌干扰物筛选测定法的最新更新指南进行GLP验证。他已经接受了IBSC委员会和生物安全官的职责。2019年，他在行业内具有较高影响力的期刊上发表了两篇论文，还有几篇论文正在筹备中。

近期，印度处于领先地位的CRO公司JRF Global的致突变和体外研究负责人Rajendra Nagane博士在接受AgroPages世界农化网采访时，谈到了JRF在全球农用化学品和专用化学品行业进行体外替代研究所做的努力。

监管机构正在减少动物试验，推广体外实验。JRF（JAI RESEARCH FOUNDATION）采取了什么主动行动来响应这个趋势呢？

JRF紧跟指导原则的最新进展，并持续监测全球法规发展的最新情况。JRF自2013年以来，一直为全球客户提供GLP体外替代试验。JRF目前完全采用了动物试验中的3R原则，即：用于“减少（Reduce）”测试所需的动物数量，有助于“替代（Replace）”一些动物试验，或“改善（Refine）”动物试验程序以减轻疼痛和痛苦的替代方法。体外试验方法使用（改造的）组织，整个细胞或部分细胞来进行研究。JRF可根据全球各种法规指南提供这些研究服务。

皮肤刺激性或皮肤腐蚀性可以预测吗？

根据化合物的pH值和物理化学特性可以初步预测皮肤刺激性和腐蚀性。此外，可以使用QSAR工具获取有关化合物性质的一些信息。

如何评估皮肤腐蚀性？

使用重建的人类皮肤组织（RhE）进行体外皮肤腐蚀性试验，以确定暴露是否对皮肤造成不可逆的损害，表现为表皮可见的坏死。使用活体染料MTT测定细胞活力，可用于区分活细胞和死细胞。

您能解释一下体外皮肤刺激现象吗？

皮肤刺激的结果是红斑和水肿形式的反应。该试验确定了受损的角质形成细胞释放中间体，从而引起了炎症反应。这项试验也是利用重建的人上皮组织进行的，正是内皮细胞的扩张和通透性增加，导致形成的红斑和水肿。本模型中由于不良反应导致皮肤刺激而释放的细胞内含物是通过酶促将活性染料MTT [ 3 - ( 4，5 -二甲基噻唑-2 -基) -2，5 -二苯基四唑溴化物，噻唑蓝]转化为蓝色甲酰胺盐，利用多模式微孔板检测仪从组织提取后，定量测定光密度。激发态产物通过其将细胞活力降低到规定阈值（即≤50％）以下的能力来鉴定。

在皮肤刺激性研究中，自上而下或自下而上的程序是什么？

如果预期试验项目是没有腐蚀性或刺激性的，则可以执行自下而上的程序。如果结果显示无刺激性，则首先进行皮肤刺激性研究（OECD 439），然后无需进一步测试。如果采用自上向下方法，则首先进行皮肤腐蚀（OECD 431），并且如果结果显示出皮肤腐蚀反应，则无需进一步测试。通常，当我们期望测试项目具有腐蚀性/刺激性时，使用自上向下的方法。如果采用自下而上的方法，假如皮肤刺激明显显示为阴性反应，则无需进一步测试。可以根据可获得的理化数据确定测试的优先级，仅当我们没有明确的适应症时才需要进行动物研究。

什么时候不需要进行皮肤腐蚀性试验？

根据ECHA指南，以下情况不需要进行皮肤腐蚀性试验：

1. 强酸（pH≤2.0）或碱（pH≥11.5），现有资料表明应将其归类为对皮肤有腐蚀性（第1类）。

2. 室温下在空气中或与水或水汽接触时自燃。

3. 按经皮肤途径被分类为剧毒（第1类）。

4. 通过皮肤途径进行的急性毒性研究并未表明皮肤受到刺激直至达到极限剂量水平（2000 mg / kg体重）。

JRF可以提供哪些体外皮肤致敏研究服务？