对流免疫电泳原理

作者：王韵壹、李英、熊慧卿

对流免疫电泳原理：

原理

在一定条件下，胶体颗粒是带有电荷的，这些带电胶体颗粒在电的影响下发生移动。如胶体颗粒带负电，则移向阳极；反之，移向阴极。这种现象称为电泳。

对流免疫电泳是将病人血清（待检抗原）放在琼脂板阴极端孔内，已知抗血清（含有已知抗体）放于阳极端孔内，在碱性环境条件下同时进行电泳，抗原由阴极向阳极移动快，医|学教育网搜集整理而抗体系丙种球蛋白，等电点在pH6～7之间，故带负电荷少，移动速度慢，由于电渗作用结果向阴极倒退，于是抗原抗体在电场中相遇，当两者比例适当时，则特异性抗原抗体互相结合，便形成肉眼可见的白色沉淀线。

材料

1.1%，PH8.6，0.075M巴比妥缓冲液。

2.抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检病人血清。

3.玻片、吸管、打孔器、毛细滴管、电泳仪等。

方法

1.将用缓冲液配制好的1.2%琼脂隔水加热溶化，趁热吸取3.5ml加于玻片上，冷凝后打孔，孔直径3毫米，二孔间距离3毫米。

2.分别从上至下向左列1、3、5孔内加入抗AFP血清；向右列2孔内加待检病人血清，4孔内加已知AFP阳性血清作为阳性对照，6孔内加已知阴性对照血清。各孔加满为度，勿使外溢。

3.将琼脂板置于电泳槽内，抗原端入阴极侧，抗体放阳极侧，二端贴上浸透电泳缓冲液的4层纱布条。

4.通电，固定电压5-6伏/厘米长，通电45～60分钟左右。

结果观察电泳毕，关闭电源，取出琼脂板。在黑色背景上方，透过散射光线，首先观察3与4孔间（阳性对照组）、5与6孔间（阴性对照组）的白色沉淀线是否出现；再看试验孔，如孔间未出现这样的沉淀线，则该待检血清为AFP阴性血清。