2021『检测技术』主题文章

作者：杨超月

2021『检测技术』主题文章

本期精选《生物技术通报》

2020-2021年『 检测技术』主题高关注度文章，

1. CRISPR-Cas系统在核酸检测中的应用研究

胡秀文，刘华，王宇，唐雪明，王金斌，曾海娟，蒋玮，李红

摘要：CRISPR-Cas系统是一种高效、实用的基因编辑工具,被广泛应用于基因组编辑和调控机制研究。目前发现的Cas系列核酸酶工具为开发用于各种目的的不同类型核酸检测,具有广阔的应用前景。CRISPR-Cas系统的高灵敏度和高特异性,使其在病原体检测、单核苷酸多态性（SNP）分析以及基因突变检测等发挥了极其重要的作用;另外,CRISPR-Cas系统在核酸检测领域的精确、高效性,间接推动了基础生物学和应用生物学研究的进展。概述了不同类型的靶向特定核酸检测的CRISPR-Cas系统的最新进展和用途,以及与之对应的新一代的体外检测平台,旨为核酸检测领域提供新的研究思路和理论依据。

2. CRISPR/Cas9系统中的脱靶效应及检测技术研究进展

张晨，雷展，李凯，商颖，许文涛

摘要：聚类规则间隔的短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）及其相关蛋白（Cas9蛋白）已经成为精确编辑基因组的强大工具。CRISPR/Cas9系统源自于细菌和古生菌的免疫机制,结构简单、易于设计,仅需改变单引导RNA（single-guide RNA,sgRNA）上的一小段序列即可快速实现对不同基因位点的编辑。与锌指核酸酶（Zinc finger nucleases,ZFN）和转录激活因子样效应物核酸酶（Tranion activator-like effector nucleases,TALEN）技术相比,CRISPR/Cas9系统基因编辑效率更高、特异性更强。但在应用过程中不可避免的脱靶事件严重限制了CRISPR/Cas9系统的进一步发展,因此本篇文章就CRISPR/Cas9系统的脱靶类型、影响因素、降低策略以及脱靶检测技术进行综述。

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3. 等温扩增技术及其结合CRISPR在微生物快速检测中的研究进展

高威芳，章礼平，朱鹏

摘要：等温扩增技术因其对仪器依赖性低、核酸扩增高效等优势,非常适合于快速检测,已在微生物快速检测领域得到了广泛应用。本文从核酸提取、等温扩增（以环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）和重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase polymerase amplification,RPA）为例）和产物检测角度,就近年来核酸等温扩增技术的发展及其在病原微生物核酸快速检测领域的应用进行综述,并概述了核酸等温扩增技术与CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）基因编辑技术相结合的最新研究成果,为这些新兴技术的研究和未来的发展提供新思路。

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4. 基于RNAi技术的转基因玉米逆转录数字PCR检测方法

杨镇州，刘刚，许丽

摘要：针对基于RNAi技术的转基因玉米品系,研究并建立了一套逆转录芯片式数字PCR（dPCR）定量检测该品系玉米双链RNA的方法。研究内容主要包括RNA提取方法、引物探针设计、逆转录方法、dPCR反应条件及体系等方面的探索和优化。该方法的绝对定量限为2.5 copies/μL,RSD为12.4%;检测低浓度实际样品达21.7 copies/μL时,相对偏差为2.7%,RSD为14.6%,满足国际上转基因定量结果RSD≤25%的要求。将该方法用于基于RNAi技术转基因作物的定量检测,将为我国相关转基因作物的安全评价提供了精确可靠的技术手段。

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5. 抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C定性PCR检测方法

李葱葱，谢苹，董立明，夏蔚，兰青阔，闫伟，龙丽坤，李飞武

摘要：转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C是由北京奥瑞金公司研发的转mG2-aroA基因和mcry1Ah基因抗虫耐除草剂玉米新品系,对玉米螟、粘虫等鳞翅目害虫具有抗性、耐草甘膦除草剂的转基因玉米,在我国具有重要产业化应用前景。本文研发了GH5112E-117C转基因玉米的定性PCR检测方法,该方法能特异性地检测转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C,在每个反应引物浓度为0.2 μmol/L、Taq DNA 聚合酶0.625 U、DNA模板50 ng,退火温度为58℃的条件下,检测灵敏度可稳定达到0.1%。该方法为转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C的精准检测提供了一种新的技术手段,为农业转基因监管提供技术支撑。

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6. 植物青枯病菌环介导等温扩增快速检测技术研究

李信申，黄小梅，吴淑秀，黄瑞荣，魏林根，华菊玲