【AbMole科研】跟踪DNA双链断裂修复动力学多重生

作者：张馨予

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：用于生物细胞和动物中DNA双链断裂修复途径的非侵入性监测的多重生物发光修复报告基因。

追踪DNA双链断裂（DSB）修复对于理解和治疗包括癌症在内的各种疾病至关重要。在本文中，本研究描述了用于生物细胞和动物中DSB修复途径的非侵入性监测的多重生物发光修复报告基因（BLRR）。BLRR方法利用分泌的Gaussia和Vargula荧光素酶分别同时检测同源性定向修复（HDR）和非同源末端连接（NHEJ）。BLRR数据与报告HDR（R2 = 0.9722）和NHEJ（R2 = 0.919）事件的下一代测序结果一致。此外，BLRR分析可以纵向追踪细胞中HDR和NHEJ的活性，并可以检测体内异种移植肿瘤中的DSB修复。使用BLRR系统，我们观察到CRISPR / Cas9介导的编辑效率之间的显着差异，其中引导RNA的间隔仅为1-10 bp。此外，BLRR分析检测到由小分子调节剂诱导的DSB修复动力学改变。最后，通过抑制DNA修复蛋白RAD51同源物1（RAD51），发现了HDR抑制人胶质母细胞瘤和神经胶质瘤癌干细胞中抗癌性强心苷的功能。BLRR方法提供了一个高度敏感的平台，可以同时并纵向跟踪HDR和NHEJ动态，该平台对于阐明DSB修复的生理学和治疗发展具有足够的通用性。

NU7441（Abmole，M1809，纯度 >98%）被用于处理细胞。将细胞转染后16小时，将培养基替换为含有1％DMSO（对照）或指定浓度的NU7441的新鲜培养基1小时，然后替换为新鲜培养基。

Figure 6. The BLRR assay can detect altered dynamics for DSB repair induced by small-molecule modulators.

为了研究BLRR是否可以有效监测小分子化合物对DSB修复的作用，用HDR增强剂（NU7441）或抑制剂（B02）处理了BLRR细胞，并通过BLRR分析评估了HDR / NHEJ动力学。NU7441抑制DNA依赖性蛋白激酶催化亚基以增加HDR，而B02抑制RAD51重组酶以阻碍HDR。NU7441处理后，Gluc信号随着Vluc信号的降低而呈剂量依赖性增加。

鸣谢：Jasper Che-Yung Chien, et al. Nucleic Acids Res. 2020 Aug 14;gkaa669.